Clonagem e purificação de anticorpos recombinantes contra diferentes fatores de virulência de Escherichia coli diarreiogênica

Resumo

Infecções diarréicas agudas ainda são apontadas como significante causa de morbidade e mortalidade. Anualmente são estimadas aproximadamente de 2 a 2,5 milhões de mortes associadas à diarreia em crianças abaixo de cinco anos. Dentre os patógenos causadores de diarreia as Escherichia coli diarreiogênicas (DEC), são responsáveis por 30 a 40% dos episódios de diarreia aguda nos países em desenvolvimento, sendo o segundo maior causador de diarreia, ficando atrás somente do rotavírus. Essas linhagens patogênicas são usualmente classificadas em diferentes patótipos, levando em consideração seus mecanismos de virulência específicos, síndromes clínicas relacionadas e seus aspectos epidemiológicos. Dentre as E. coli diarreiogênicas, as categorias de relevada importância epidemiológica são: E. coli enterotoxigênica (ETEC) que apresenta como principais fatores de virulência a produção das toxinas termo-estável (ST) e termo-lábil (LT), E. coli enteropatogênica (EPEC) possui intimina e Escherichia coli produtora da toxina de Shiga (STEC) produz as potentes citotoxinas de Shiga (Stx1 e/ou Stx2). Neste contexto, o diagnóstico é uma importante ferramenta para minimizar e controlar ocorrências. Todavia, enquanto que V. cholerae, Shigella spp e rotavírus podem ser detectados por ensaios padrões, a detecção de E. coli é mais difícil, aliado ao fato de que, erroneamente, este patógeno não costuma ser considerado como principal causa de diarreia em crianças. Os anticorpos são ferramentas importantes na detecção de diversos patógenos e os ensaios imunossorológicos apresentam diversas vantagens quando comparados a outros métodos de detecção. Dentre as inúmeras vantagens desses métodos podemos citar a alta especificidade e sensibilidade nos resultados. Entretanto, apesar da homogeneidade, especificidade e sensibilidade dos anticorpos, estes demandam tempo e capacitação para o seu desenvolvimento. A tecnologia do DNA recombinante permite o desenvolvimento de construções que mantenham ou aperfeiçoem as propriedades funcionais de um anticorpo. Dentre as diferentes construções baseadas na estrutura do anticorpo, podemos citar os fragmentos variáveis em cadeia única (single chain Fragments variable ou scFv). O scFv é um fragmento de anticorpo de menor tamanho, mas que ainda retém a capacidade de se combinar com o antígeno. Diferentes sistemas de expressão estão disponíveis para a produção de scFv, podendo-se optar entre células procarióticas ou eucarióticas, sendo, portanto mais baratos e rápidos, consistindo assim uma nova opção para a detecção rápida desses patógenos, otimizando assim o imunodiagnóstico.