Caracterizacao de tres fatores de transcricao pertencentes a familia lysr de xulella fastidiosa.

Resumo

Desde o seqüenciamento do genoma da Xylella fastidiosa linhagem 9a5c, houve um grande aumento de informações relacionadas a fisiologia e patogenia deste microrganismo, porém muita das proteínas produzidas por esta bactéria ainda não apresentam funções preditas. Sendo assim, este trabalho tem como objetivo caracterizar estrutural e funcionalmente três proteínas: XfCysB (orf Xf0683), XfLysRL (orf Xf1448) e XfycjZ (orf Xf1480). Essas proteínas apresentam alta similaridade com membros da família de reguladores transcricionais do tipo LysR (LTTR). Os LTTR constituem uma família de reguladores que apresentam funções diversas: regulação de genes envolvidos no metabolismo, divisão celular, quorum sense, formação de biofilme, virulência, entre outros. Dentre as proteínas em estudo, a única proteína que possui predição de classificação mais específica dentro da família LysR é a XfCysB, cujas proteínas homólogas estão envolvidas na biossíntese de cisteína. A caracterização estrutural será compreendida por ensaios como Dicroísmo Circular (CD) e Cromatografia de Exclusão por Peso Molecular, enquanto que a funcional compreenderá a produção de anticorpos para as proteína e realização de Western blot dos anticorpos contra o biofilme de X. fastidiosa. A expressão dos genes que codificam as três proteínas será verificada por PCR quantitativo durante as diferentes fases da formação de biofilme e relacionado à expressão protéica. Esses estudos de expressão gênica das proteínas em diferentes fases do biofilme abrirão uma perspectiva funcional do papel deste regulador no desenvolvimento do biofilme de Xylella. Estudos recentes de expressão global de genes desenvolvidos pelo grupo do Centro APTA Citros, demonstraram que genes da família LysR estão envolvidos com a regulação de genes associados a resposta a cobre, mas não a tetraciclina. Desta forma este estudo visa também avaliar em qual fase da formação de biofilme os genes e as respectivas proteínas da família LysR são ativados na presença de cobre. (AU)