Caracterização funcional e molecular de proteínas potencialmente relacionadas a fitopatogenicidade da bactéria formadora de biofilme Xylella fastidiosa

• Processo: 12/51580-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de maio de 2013 - 31 de julho de 2015
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Agronomia - Fitossanidade
• Pesquisador responsável: Anete Pereira de Souza
• Beneficiário: Anete Pereira de Souza
• Instituição Sede: Centro de Biologia Molecular e Engenharia Genética (CBMEG). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Doenças de plantas Clorose variegada dos citros Citricultura Xylella fastidiosa Expressão gênica Genomas Regulação da expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Citrus | Cvc | Expressao Proteica | Fitopatogenicidade | Xylella Fastidiosa

Resumo

Com o sequenciamento do genoma da bactéria Xylella fastidiosa linhagem 9a5c, houve um grande aumento de informações relacionadas à sua fisiologia e patogenia, porém muitas das proteínas identificadas na análise de seu genoma ainda não apresentam funções preditas, sendo classificadas como proteína hipotética ou de função desconhecida. Desta forma, este projeto visa avaliar as funções biológicas das proteínas identificadas em projetos de sequenciamento para a elucidação dos processos de patogenicidade. Sendo assim, este trabalho tem como objetivo caracterizar funcionalmente sete proteínas denominadas: ycjZ (ORF Xf1480), operon do sistema toxina-antitoxina (Xf2162 e Xf2163), TolC (ORF Xf2255), VirJ (ORF Xf0617 e Xf 2329) e a VapD (ORF Xfb0051). A primeira apresenta alta similaridade com membros da família de reguladores transcricionais do tipo LysR (LTTR), que participam na regulação de genes envolvidos na divisão celular, no quorum sense, na formação de biofilme, na virulência e na resposta ao estresse oxidativo. As outras seis proteínas estão inseridas em processos metabólicos diferentes, mas não menos importantes, tais como, formação de bomba de efluxo (TolC), sistema de secreção de macromoléculas tipo IV e transferência horizontal de DNA (AcvB) e proteínas que respondem a variações de temperatura (VapD). A caracterização funcional compreenderá a produção de anticorpos para cada proteína alvo, seguida de imunodetecção durante as diferentes fases de formação do biofilme de X. fastidiosa. Além disso, a expressão das proteínas também será quantificada utilizando a técnica de qRT-PCR, utilizando plantas de laranjas infectadas que apresentam clorose, enquanto a caracterização estrutural será compreendida por ensaios de Dicroísmo Circular (CD), e Cromatografia de Exclusão por Peso Molecular. (AU)

Publicações científicas

(7)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

PEREIRA MACHADO, AGNES THIANE; BARRETO FONSECA, EMANUELLA MARIA; DOS REIS, MARCELO AUGUSTO; SARAIVA, ANTONIO MARCOS; DOS SANTOS, CLELTON APARECIDO; SZYMANSKI DE TOLEDO, MARCELO AUGUSTO; POLIKARPOV, IGOR; DE SOUZA, ANETE PEREIRA; APARICIO, RICARDO; IULEK, JORGE. Conformational variability of the stationary phase survival protein E from Xylella fastidiosa revealed by X-ray crystallography, small-angle X ray scattering studies, and normal mode analysis. PROTEINS-STRUCTURE FUNCTION AND BIOINFORMATICS, v. 85, n. 10, p. 1931-1943, OCT 2017. (12/51580-4, 08/55690-3, 05/03234-6, 04/02540-3, 11/15792-4, 06/52844-4, 01/07533-7)

MENDES, JULIANO S.; SANTIAGO, ANDRE S.; TOLEDO, MARCELO A. S.; HORTA, MARIA A. C.; DE SOUZA, ALESSANDRA A.; TASIC, LJUBICA; DE SOUZA, ANETE P.. In vitro Determination of Extracellular Proteins from Xylella fastidiosa. FRONTIERS IN MICROBIOLOGY, v. 7, DEC 26 2016. (01/07533-7, 12/51580-4, 11/50268-4)

SANTOS, CLELTON A.; JANISSEN, RICHARD; TOLEDO, MARCELO A. S.; BELOTI, LILIAN L.; AZZONI, ADRIANO R.; COTTA, MONICA A.; SOUZA, METE P.. Characterization of the TolB-Pal trans-envelope complex from Xylella fastidiosa reveals a dynamic and coordinated protein expression profile during the biofilm development process. BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-PROTEINS AND PROTEOMICS, v. 1854, n. 10, p. 10-pg., 2015-10-01. (09/53021-0, 08/55690-3, 12/51580-4, 01/07533-7)

SANTOS, CLELTON A.; JANISSEN, RICHARD; TOLEDO, MARCELO A. S.; BELOTI, LILIAN L.; AZZONI, ADRIANO R.; COTTA, MONICA A.; SOUZA, METE P.. Characterization of the TolB-Pal trans-envelope complex from Xylella fastidiosa reveals a dynamic and coordinated protein expression profile during the biofilm development process. BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-PROTEINS AND PROTEOMICS, v. 1854, n. 10, A, p. 1372-1381, OCT 2015. (01/07533-7, 08/55690-3, 12/51580-4)

MENDES, JULIANO S.; SANTIAGO, ANDRE DA S.; TOLEDO, MARCELO A. S.; ROSSELLI-MURAI, LUCIANA K.; FAVARO, MARIANNA T. P.; SANTOS, CLELTON A.; HORTA, MARIA AUGUSTA C.; CRUCELLO, ALINE; BELOTI, LILIAN L.; ROMERO, FABIAN; et al. VapD in Xylella fastidiosa Is a Thermostable Protein with Ribonuclease Activity. PLoS One, v. 10, n. 12, DEC 22 2015. (01/07533-7, 12/51580-4, 11/50268-4)

SANTIAGO, ANDRE S.; SANTOS, CLELTON A.; MENDES, JULIANO S.; TOLEDO, MARCELO A. S.; BELOTI, LILIAN L.; SOUZA, ALESSANDRA A.; SOUZA, ANETE P.. Characterization of the LysR-type transcriptional regulator YcjZ-like from Xylella fastidiosa overexpressed in Escherichia coli. Protein Expression and Purification, v. 113, p. 72-78, SEP 2015. (01/07533-7, 12/51580-4, 11/50268-4)

LEHNER, BENJAMIN A. E.; BENZ, DOMINIK; MOSHKALEV, STANISLAV A.; MEYER, ANNE S.; COTTA, MONICA A.; JANISSEN, RICHARD. Biocompatible Graphene Oxide Nanosheets Densely Functionalized with Biologically Active Molecules for Biosensing Applications. ACS APPLIED NANO MATERIALS, v. 4, n. 8, p. 8334-8342, AUG 27 2021. (10/51748-7, 10/18107-8, 13/02300-1, 15/16611-4, 12/51580-4)