Caracterização funcional da dupla mutação BRAFV600E + RET/PTC3 em carcinoma papilífero da tiroide

Resumo

O Carcinoma Papilífero de Tiroide (CPT) é o subtipo histológico mais comum entre os tumores da tiroide. Alterações nos genes que codificam para a via da MAPK têm um papel crucial na sua patogênese, sendo que mutações nos oncogenes BRAF e RAS e rearranjos envolvendo o oncogene RET são as mais frequentemente encontradas. Além disso, o reconhecimento dessas alterações e os consequentes estudos de associação podem levar à escolha da terapia mais eficiente para cada paciente, principalmente no caso de terapia com drogas-alvo. Nosso grupo investigou a prevalência dos rearranjos RET/PTC e da mutação no gene BRAF V600E em uma série de CPT (n=118) e correlacionou com dados clínico-patológicos e com o perfil da expressão gênica. Nesta análise identificamos a co-ocorrência de mutação em BRAF V600E e rearranjos RET/PTC em aproximadamente 13% dos casos, sendo que a isoforma RET/PTC3 ocorreu in 87% das vezes. Estes dados têm importantes implicações clinicas com relação ao prognóstico e tratamento do paciente. Assim, por meio de análise funcional, investigaremos o efeito da presença das duas mutações nas características biológicas das células Nthy-ori 3-1 (célula folicular tiroideana normal imortalizada). Para isso as células Nthy-ori 3-1 serão transformadas com vetor de expressão pBudCE4.1 contendo cDNA de BRAF V600E e de RET/PTC3 concomitantemente e os vetores controle contendo BRAF V600E ou RET/PTC e vetor vazio. Os clones selecionados serão avaliados quanto ao efeito da dupla mutação na expressão dos genes do metabolismo do iodo NIS, TSHR, TPO, TG e PDS, bem como, na ativação das vias MAPK e PIK3/AKT/mTOR. Além disso, avaliaremos o crescimento e viabilidade, ciclo celular, apoptose e crescimento independente de ancoragem e o nível de instabilidade gênica com formação de quebras na fita dupla. Por fim, analisaremos o efeito de droga alvo para BRAF nas células com a expressão ectópica de RET/PTC3 e BRAF V600E, uma vez que foi verificado que a presença concomitante de mutações nos genes BRAF e RAS induziu resistência nos pacientes com melanoma. Essas análises permitirão melhor compreensão da patogênese do CPT, assim como na decisão da melhor terapia para os pacientes com as diferentes mutações. (AU)