Avaliação do efeito da expressão heteróloga de variantes de splice alternativo do gene hSPAG11B no desenvolvimento de artrite inflamatória em camundongos C57BL/6 selvagens ou nocaute para F2rl1 (PAR2)

Resumo

O gene sperm-associated antigen 11 B de humano (hSPAG11B) encontra-se em um cluster de ²-defensinas no cromossomo 8p23. Mecanismos de splice alternativo envolvendo o recrutamento diferencial de 2 promotores e múltiplos exons resultam na produção de 7 transcritos distintos (hSPAG11A, B, C, D, E, G e H). Dados da literatura tem mostrado o envolvimento de isoformas de SPAG11 na resposta imunológica inata e reprodução, entretanto, o mecanismo de ação ainda é desconhecido. Interessantemente, um estudo recente in vitro caracterizou a isoforma hSPAG11D e sua porção N-terminal (conservada na isoforma hSPAG11C), como um potente inibidor da triptase de mastócito, um importante mediador inflamatória que age via ativação do Receptor Ativado por Protease 2 (PAR2). O objetivo do presente projeto é investigar o efeito da expressão heteróloga das isoformas hSPAG11C, D e E sobre o desenvolvimento da artrite inflamatória, via inibição da sinalização triptase/PAR2. A expressão de hSPAG11C, D e E no joelho do camundongo será obtida por meio da transdução dessa articulação com partículas lentivirais derivadas de vetores de transferência contendo as regiões codificadoras das isoformas supracitadas, em associação com partículas virais Vpx-VLPs. Dois dias após a transdução viral da articulação do joelho de camundongos C57BL/6 selvagens ou nocautes para F2rl1 (PAR2), os animais serão submetidos à indução de artrite utilizando o modelo mBSA/IL-1. O desenvolvimento de edema será acompanhado diariamente por meio de medidas do diâmetro médio-lateral do joelho. Sete dias após a indução de artrite, os animais serão sacrificados e amostras de lavado articular serão analisadas bioquimicamente para determinar parâmetros inflamatórios por cinética enzimática como a atividade de mieloperoxidase (índice bioquímico de migração de neutrófilos) e atividade de serino-proteases. Adicionalmente, o perfil de citocinas Th1/2 e 17 será avaliado pelo método Cytometric Bead Array. As articulações serão processadas por técnicas histológicas de rotina e as amostras submetidas à análise histopatológica. (AU)