Avaliação do perfil metabólico global urinário do refluxo vésico-ureteral por CE-MS

Resumo

Este projeto pretende desenvolver e validar métodos por CE-MS, em ambos os modos de ionização por electrospray, positivo e negativo, e explorar a sua capacidade para a investigação do perfil urinário do refluxo vésico-ureteral em crianças, com uma abordagem metabolômica. No desenvolvimento dos métodos CE-MS, as composições do eletrólito de corrida, do líquido auxiliar, e parâmetros instrumentais do analisador de massas serão sistematicamente variados e otimizados para ambos os modos de ionização. Os dados brutos obtidos por CE-MS serão processados usando o software de acesso livre XCMS. Adicionalmente, um algoritmo de processamento de dados desenvolvido pelo grupo será utilizado comparativamente ao XCMS. Cada conjunto de dados espectrais (análise global) será processado separadamente e avaliado estatisticamente por meio de métodos multivariados, incluindo a análise de componentes principais (PCA) e a análise discriminante por mínimos quadrados parciais (PLS-DA). Os metabólitos discriminadores do refluxo vésico-ureteral serão então identificados pela análise de padrões autênticos, por fragmentação espectral e pelo uso de bibliotecas. Adicionalmente, uma visita "doutorado sandwich" ao Imperial College London (ICL) está sendo considerada, onde a aquisição de dados por UPLC-MS, em colunas C18 e HILIC, será contemplada, visando explorar a complementaridade de informação metabólica, decorrente do uso de diversas plataformas analíticas ortogonais. Métodos UPLC-MS robustos são usados rotineiramente no ICL para diversas aplicações clínicas e bibliotecas contendo tempos de retenção e m/z de algumas centenas de metabólitos têm sido construídas e atualizadas ao longo de vários anos e poderão ser empregadas no presente projeto para identificação geral dos metabólitos encontrados nas amostras em estudo. (AU)