Caracterização da função fisiológica e patológica de membros da família de adaptadoras de transporte FEZ1/FEZ2

Resumo

A proteína UNC-76 foi identificada como essencial para a fasciculação e elongação de axônios do verme Caenorhabditis elegans. Da mesma forma, a proteína ortóloga de mamíferos FEZ1 apresenta expressão em tecidos neuronais e camundongos knockout para o gene FEZ1 apresentam desvios de comportamento que remetem a desordens neurológicas brandas. Trabalhos do grupo mostraram que FEZ1 é uma proteína multifuncional (hub), capaz de interagir com inúmeras proteínas, naturalmente desenovelada e se apresenta como um dímero em solução. Juntos, esses dados sugerem que a FEZ1 atua junto ao citoesqueleto como uma proteína adaptadora dimérica e bivalente. Essa hipótese é reforçada pelas observações de que a FEZ1 interage e colocaliza com elementos do citoesqueleto (e.g., tubulina, CLASP2) e proteínas motoras do tipo kinesina (KIF3A). Neste contexto, a superexpressão de FEZ1, em células HEK293, provoca o aparecimento de núcleos multilobulados ("flower-like") em mais de 40% das células transfectadas. Tal fenótipo é comum em alguns tipos de leucemia e já foi associado à resistência das células tumorais a drogas. A proteína humana paráloga FEZ2, de expressão ubiquitária, pertence à família de proteínas FEZ e demonstramos que FEZ2 interage com as mesmas proteínas que a FEZ1 e com mais outras 19 proteínas. Isso pode sugerir que FEZ2 ganhou novas funções adicionais. Aqui pretendemos estudar o papel funcional neuro fisiológico das proteínas FEZ1 e FEZ2 e aspectos dos mecanismos por trás da formação do fenótipo de núcleos multilobulados ("flower-like" nuclei) no caso da superexpressão da FEZ1 observada em certos tipos de câncer. Para tal, será realizada a geração de camundongos knockout FEZ2 e sua caracterização funcional, a caracterização da função das proteínas FEZ1 e SCOCO no núcleo da célula no contexto da regulação da transcrição, a identificação de outras proteínas celulares envolvidas na formação de núcleos "flower-like" induzidos pela superexpressão da FEZ1 por espectrometria de massas e experimentos de knock down por iRNA. (AU)