Estabilidade térmica e cinética da hemoglobina extracelular gigante de Glossoscolex paulistus (HbGp): efeitos de surfactantes, sais, ureia, do estado de oxidação do ferro do heme e do pH do meio.

Resumo

A hemoglobina extracelular de Glossoscolex paulistus (HbGp) possui uma extraordinária massa molecular de 3,6 MDa, organizada em um arranjo oligomérico disposto como dois discos hexagonais sobrepostos, em forma de "bracelete". A estrutura quaternária da HbGp apresenta 144 cadeias com grupo heme (globinas) e 36 cadeias sem grupo heme (linkers). A HbGp dissocia-se em pH alcalino e na presença de altas concentrações de surfactantes, como, por exemplo, SDS e CTAC, a 25 oC. Estudos recentes sobre a estabilidade térmica da HbGp em diferentes valores de pH, na ausência e presença de SDS e CTAC, usando as técnicas de CD, SAXS e DLS, tem revelado informações importantes sobre o processo de desnaturação e agregação dessa proteína. Entretanto, as mudanças estruturais, e o processo de oxidação do ferro e a cinética de agregação da HbGp, na presença e ausência de surfactante ainda são praticamente desconhecidos. Nesse contexto, o presente projeto de pós-doutorado propõe o aprofundamento dos estudos da cinética de agregação da oxi- e cianometa-HbGp, na ausência e presença de SDS e CTAC, em diferentes temperaturas, por DLS. Também propomos o uso de novas técnicas, tais como FTIR e fluorescência, para investigar mudanças estruturais durante o processo de desnaturação térmica da oxi- e cianometa-HbGp, na ausência e presença de surfactante em pH ácido e neutro. Propomos também, investigar o efeito da presença de sais dicátions, MgCl2 e CaCl2, e do sal monocátion, NaCl, na estabilidade térmica da HbGp em pH 7,0, monitorado por SAXS. Pretendemos ainda usar a técnica eletroanalítica de voltametria cíclica, para monitorar o processo de desnaturação da oxi- e cianometa-HbGp induzido por cloreto de guanidina e ureia, em pH 7,0, a 25 oC. O uso em conjunto dessas técnicas contribuirá para o aprofundamento no conhecimento dos fenômenos de dissociação oligomérica, desnaturação e agregação desta hemoglobina gigante, que vem sendo estudada pelo nosso grupo de Biofísica Molecular, do Instituto de Química de São Carlos (IQSC) a vários anos.