Clonagem, expressão e análise da interação da proteína M2-1 de HRSV com Flavonides: busca para alvos no bloqueio da replicação viral

Resumo

O Vírus Sincicial Respiratório Humano (hRSV) é o principal agente causador de doenças respiratórias agudas severas (ARI), como pneumonia e bronquiolite. Trata-se de um vírus da família Paramyxoviridae, com simetria helicoidal e envelope lipídico. Possui um genoma de RNA fita simples, não segmentado, com 10 genes codificantes. Um dos fatores que contribuem para o sucesso na replicação viral é a interação da M2-1 com as proteínas P, M e com o RNA. Tal proteína pode agir através da interação com RNA e assim participar efetivamente no processo de replicação viral bem como atuar de forma a auxiliar no silenciamento do complexo ribonucleoprotéico (RNP) do RSV. Deste modo o ligante que realizar interação com a M2-1 é um potencial candidato a prevenir as interações M2-1 com RNA e demais proteínas, impedindo deste modo o sucesso da replicação viral. Para investigar a interação de um potencial candidato a inibição da atividade da M2-1 o objetivo do projeto é clonar, expressar e purificar a proteína M2-1 do hRSV e, em seguida, determinar sua característica físico-química de interação com flavonóides em diferentes condições de temperatura. Para clonagem e expressão do gene M2-1 foram escolhidos o vetor pET28A e a bactéria Escherichia coli da linhagem BL21. A proteína expressa será purificada em cromatografia de afinidade e cromatografia de troca iônica. A estabilidade térmica e interação com flavonóides serão analisadas por espectroscopia. Os resultados do presente estudo propiciarão conhecer a estabilidade da proteína e o sítio de interação de pequenos ligantes, possibilitando obter modelo de interação e propor modelos terapêuticos eficientes. A longo prazo a estrutura da proteína poderá ser determinada, para ensaios mais refinados localizando, assim, o sítio de ligação destes flavonóides. (AU)