Formação e caraterização dos complexos formados entre receptor de hormônios tireoidianos e coativadores

Resumo

Parte significativa da população sofre com problemas relacionados à tireoide. O hormônio tireoidiano regula diversas funções do sistema endócrino por meio da interação deste com seu receptor (receptor nuclear de hormônio tireoidiano - TR). Na presença de um ligante esse receptor sofre uma mudança conformacional que permite a interação deste com uma proteína coativadora, como por exemplo, a GRIP. A associação do TR com coativador auxilia na abertura da estrutura da cromatina, através do recrutamento de acetilases de histonas, resultando na ativação da transcrição de diversos genes, principalmente dos genes ligados a produção de proteínas que regulam o metabolismo basal.Este projeto visa estudar a formação e a caracterização do complexo de receptor nuclear com coativador para mapear melhor suas interfaces de interação e entender melhor sua formação. Para isso serão realizados ensaios que possibilitem avaliar a estequiometria dos complexos, a afinidade entre essas proteínas; e também a atividade dos ligantes desses receptores. As proteínas serão purificadas e os complexos serão formados por ensaios de pull down like ou por coexpressão. Os complexos serão analisados por espectrometria de massas utilizando reação de cross-linking para mapear as interações entre as proteínas formadoras do complexo, buscando-se definir novas interfaces de interação. A estequiometria desses complexos será investigada por meio de ultracentrifugação analítica, e estudos da afinidade entre as proteínas serão conduzidos utilizando anisotropia de fluorescência. Por fim, serão realizados testes de cristalização dos complexos, o que permitiria uma melhor compreensão sobre a estrutura dos mesmos. É importante mencionar que conhecer a interação destas proteínas irá fornecer subsídios para o melhor entendimento dos mecanismos de ativação do TR, estando diretamente relacionado ao planejamento de fármacos, dado que a superfície de interação entre as duas proteínas pode ser considerada um novo alvo de atuação de ligantes.