Modulação da atividade da CPM pelos receptores B1 e B2 de cininas em diferentes modelos celulares

Resumo

A carboxipeptidase M (CPM) é uma enzima do sistema calicreína-cininas, fixada na membrana por âncora de GPI, cujo domínio catalítico possui atividade carboxipeptidásica que hidrolisa resíduos em C-terminal que tenham Arg ou Lys, gerando agonistas para os receptores B1. Sabe-se que CPM e receptores B1 de cininas estão co-localizados em microdomínios da membrana plasmática, interagindo entre si, de maneira que a enzima facilita a sinalização desses receptores, aumentando a liberação de NO. A interação enzima-receptor em microdomínios da membrana plasmática é relativamente pouco estudada na literatura, sobretudo sob o aspecto da enzima. Neste contexto, este estudo torna-se determinante ao se considerar o papel das ectoenzimas, como a CPM, no sistema como o da calicreína-cininas. A função endócrina deste sistema depende dos níveis circulantes dos seus agonistas, cujo controle da disponibilidade local é feito justamente pelas peptidases que estão próximas aos respectivos receptores. Sendo assim, neste trabalho, testaremos a hipótese de que a interação entre CPM e receptores B1 de cininas também pode afetar a atividade daquela enzima frente ao substrato fluorescente dansyl-Ala-Arg. Para isto, estudaremos dois sistemas de células: um sistema fisiológico em que ambas as proteínas, CPM e receptores, estão expressas, ou seja, cultura primária de células endoteliais provenientes de animais selvagens e knockout não só para o receptor B1 e cininas, como também para os receptores B2 e duplo knockout para ambos; e um sistema artificial, ou seja, células HUVEC transfectadas com CPM e co-transfectadas com CPM e receptor B1 e/ou B2. Também será avaliado o efeito dos antagonistas dos receptores na atividade da enzima e a liberação de NO pelas células endoteliais. Este trabalho irá contribuir não só para o entendimento geral do sistema calicreína-cininas, mas também localmente, na interação entre CPM e receptores de cininas e o resultado disto na função endotelial. (AU)