Estudo do perfil e atividade enzimática do fluido dentinário humano

Resumo

A destruição causada pelo processo de cárie pode ser acelerada ou limitada pelas respostas do complexo dentino-pulpar. O fluido dentinário é um componente importante nesse mecanismo, visto que forma um meio de comunicação entre a polpa e as diferentes regiões da dentina, permitindo o transporte de nutrientes e moléculas provenientes da polpa. A degradação da matriz dentinária é observada em processos fisiopatológicos, como na progressão da cárie. Acredita-se que haja uma participação das enzimas proteolíticas do próprio hospedeiro na degradação da matriz orgânica dentinária. Sendo assim, um maior entendimento sobre o mecanismo de degradação do colágeno, principal componente da matriz orgânica da dentina se faz necessário. Portanto, a presente proposta visa verificar a presença de diferentes classes de enzimas proteolíticas no fluido dentinário, para então, verificar um possível envolvimento dessas enzimas na progressão das lesões de cárie. A hipótese geral a ser testada considera que durante a progressão da cárie dentária, as enzimas proteolíticas possam ser transportadas via fluido dentinário, passando a degradar o colágeno exposto na dentina. O presente estudo terá como objetivo identificar e mapear as famílias de proteases presentes no fluido dentinário extraído de dentes sadios e cariados, realizando uma análise proteômica (perfil protéico) dessa estrutura. Na sequência, a atividade proteolítica endógena do fluido dentinário extraído de dentes sadios e cariados será avaliada em função das proteases identificadas. Para a identificação e quantificação relativa de proteínas extraídas do fluido dentinário será utilizada a cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa (nLC-ESI-MS/MS) e como método complementar, as principais enzimas também serão quantificadas por Western Blotting. Será também avaliada a atividade proteolítica de algumas das enzimas previamente identificadas através de análise espectrofluorimétrica usando substratos fluorogênicos específicos. A atividade gelatinolítica será também avaliada por zimografia. (AU)