Testes pré-clínicos de formulações vacinais baseadas em proteínas e adenovírus recombinantes expressando a proteína do circumsporozoíta de Plasmodium vivax

Resumo

O Plasmodium vivax é a segunda mais prevalente espécie causadora de malária no mundo. Dados recentes estimam que ocorra de 132-391 milhões de casos anualmente. A relativa ineficiência das medidas de controle atualmente empregadas exige o desenvolvimento de novas estratégias de prevenção, como vacinas, novas drogas e novos inseticidas. Estudos feitos nos últimos 20 anos para o desenvolvimento de uma vacina recombinante contra a infecção humana causada pelo Plasmodium falciparum foram baseados no antígeno da proteína do circumsporozoíta (CS). Em trabalho recentemente publicado, testes clínicos de fase III realizado com crianças africanas relatou uma eficácia de cerca de 50%. Fundamentado nos estudos feitos em P. falciparum, foi o nosso objetivo durante o projeto temático anterior, a geração de proteínas e adenovírus recombinantes baseados nas sequências primárias das diferentes formas alélicas da proteína CS de P. vivax. Estas proteínas e adenovirus foram utilizados com sucesso em protocolos de prime-boost heterólogo (adenovirus/proteína recombinante) em modelos experimentais de camundongos sendo capazes de induzir imunidade contra as três formas alélicas da proteína CS de P. vivax. Estes recombinantes e os respectivos protocolos de vacinação foram objetos de um pedido de patente do nosso grupo recentemente submetido ao United States Patent and Trademark Office ("Plasmodium vivax vaccine compositions WO2013142278-A1"). No presente projeto que é atualmente financiado pelo Projeto temático 2012/13032-5, será nosso objetivo dar continuidade aos nossos estudos para o desenvolvimento de uma vacina universal contra o P. vivax. Como parte do projeto de imunização com proteínas e adenovírus recombinantes baseados na proteína CS de Plasmodium vivax, será nosso objetivo a continuação da caracterização da imunogenicidade das vacinações experimentais com proteínas e adenovírus recombinantes.Para tal, as seguintes etapas pretendem ser cumpridas:1)Expressão, purificação e caracterização de uma proteína recombinante expressa em P. pastoris contendo as três regiões repetidas da proteína CS de P. vivax;2)Expressão, purificação e caracterização de uma proteína recombinante expressa em P. pastoris contendo as três regiões repetidas da proteína CS de P. vivax em fusão com a nucleoproteína do vírus da caxumba como virion-like particles (VLP);3)Expansão em células HEK 293 e purificação dos adenovírus recombinantes contendo as três regiões repetidas da proteína CS de P. vivax;4)Utilização da proteína e adenovírus recombinantes em protocolos de vacinação do tipo homólogo (proteína/proteína) e heterólogos (adenovírus/proteína) em camundongos isogênicos para análise da imunidade protetoras após o desafio com parasitas P. berghei expressando as proteínas CS de P. vivax. Esperamos ao fim deste projeto ter a demonstração do efeito biológico in vivo das nossas vacinas recombinantes. Este feito abrirá a possibilidade da produção destas em condições cGMP para testes no homem.