Caracterização das bases moleculares envolvendo a expressão dos genes do relógio circadiano da adenohipófise em diferentes estados tiroidianos e as consequências sobre a síntese/secreção dos hormônios hipofisários

Resumo

A adenohipófise ocupa uma posição central no eixo hipotálamo-hipófise-glândulas periféricas /tecidos, atuando na síntese e secreção de hormônios envolvidos com o controle de diversas funções biológicas como reprodução, crescimento e metabolismo. A concentração plasmática de hormônios hipofisários apresenta flutuações ao longo das 24 h, porém o mecanismo molecular responsável pela geração e manutenção destas oscilações ainda permanece indefinido. A geração/manutenção da ritmicidade circadiana, seja central ou periférica, apoia-se em um conjunto de genes denominados genes do relógio, ou clock genes, que se autorregulam através de alças de retroalimentação transcricionais positivas e negativas em um período de 24 h. Estes, ainda, estão envolvidos na regulação de diversos genes relacionados à ritmicidade, resposta hormonal, regulação do crescimento e morte celular em células da adenohipófise, independentemente da regulação mediada pelo relógio central, localizado no núcleo supraquiasmático.Sabe-se que no hipotiroidismo e hipertiroidismo ocorrem alterações na secreção dos principais hormônios hipofisários como GH, TSH e LH, e que a disponibilidade tecidual de T3 é controlada pela atividade da enzima desiodase tipo 2 que, por sua vez, apresenta ritmo circadiano. Além disso, as ações genômicas exercidas pelo T3 são desencadeadas a partir da sua ligação com o receptor de hormônio tiroidiano que se dimeriza com receptores da superfamília de receptores nucleares, da qual faz parte o receptor de ácido retinóico (RXR) e o RORa (retinoic acid orphan-related receptor alpha), sendo este último um importante modulador da expressão de Bmal1, um dos principais componentes do relógio. Estes dados sugerem que as células da adenohipófise apresentam um relógio intrínseco e que o padrão de expressão dos genes do relógio pode estar alterado nos diferentes estados tiroidianos, influenciando direta ou indiretamente a síntese/secreção dos hormônios hipofisários. Para investigar esta hipótese, pretendemos: a) caracterizar a presença/funcionalidade do relógio circadiano intrínseco na adenohipófise; b) identificar possíveis interações entre o relógio circadiano e a secreção dos hormônios hipofisários; c) identificar possíveis ações dos hormônios tiroidianos sobre a expressão dos genes do relógio na adenohipófise; d) caracterizar os mecanismos moleculares envolvidos nesta possível interação considerando ações transcricionais e pós-traducionais, bem como a participação de microRNAs e; e) correlacionar as alterações observadas no hipo e hipertiroidismo nos diferentes eixos hipotálamo-hipófise-glândula com o relógio circadiano. Utilizaremos metodologias como RT-qPCR, silenciamento do Bmal1 por shRNA, RNAseq, estudos in silico com o uso de ferramentas de bioinformática para análise de regiões promotoras, ensaio de ChIP-PCR, conteúdo e grau de fosforilação dos componentes protéicos do relógio em modelos de ratos submetidos ao hipotireoidismo ou hipertiroidismo na fase adulta. (AU)