Isolamento e caracterização de uma linha de cementócitos

Resumo

Os cementócitos não apenas dividem características morfológicas com osteócitos, mas também expressam inúmeros reguladores do metabolismo de tecidos duros em comum. Entretanto o conhecimento a nível celular e molecular dos cementócitos e seu papel na homeostasia do cemento dental ainda não estão esclarecidos. Desta forma, o objetivo do presente trabalho será obter e caracterizar uma linhagem de cementócitos obtidas a partir de dentes humanos que apresentam completa formação da raiz dental, sem cáries ou doença periodontal extraídos por razões protéticas ou ortodônticas. Imediatamente após a extração os dentes serão colocados em meio de biópsia. Em seguida, sobre uma placa de petri esterilizada (35x100mm), o ligamento periodontal será cuidadosamente removido de toda a extensão da raiz, e utilizando-se uma cureta de Gracey 5-6 e um microscópio clinico. A matriz do cemento dental juntamente com os cementócitos do terço apical (área de maior densidade de cementócitos) serão cuidadosamente removidos da superfície radicular e estes fragmentos transferidos para um prato de cultura de células (35x100mm) e mantidos em meio de biopsia por 24 horas a 37°C em atmosfera saturada em 5% de CO2 e 98% de umidade. O meio de biópsia será trocado por meio de cultura padrão e quando atingirem confluência as células serão tripsinizadas e congeladas em nitrogênio líquido para os futuros experimentos. Serão obtidos clones celulares e estes caracterizados utilizando-se ensaios de expressão gênica e funcionais. Com os resultados da presente proposta, espera-se desenvolver um modelo in vitro obtido a partir de tecidos humanos para se estudar a contribuição dos cementócitos no controle da homeostasia do cemento dental, identificando biomoléculas com potencial utilização no controle da formação e regeneração desse tecido. (AU)