Cultivo de células tronco mesenquimais de medula óssea humana sobre scaffolds de Nanoskin para a reconstrução da superfície ocular.

Resumo

RESUMOCultivo de células tronco mesenquimais de medula óssea humana sobre scaffolds de Nanoskin para a reconstrução da superfície ocularObjetivo: Estabelecer o cultivo das stem cells mesenquimais derivadas da medula óssea e estudar as propriedades da Nanoskin como scaffold para o transplante celular ex vivo em córneas de coelhos.Métodos: O scaffold de celulose bacteriana com fibrilas tridimensionais em nanoescala (Nanoskin), será estudado quanto à sua morfologia em microscopia eletrônica de varredura, quanto à transparência óptica em espectrofotômetro e em relação à imunogenicidade pelo estudo das citocinas inflamatórias por ELISA e pelo teste de linfoproliferação com succinimidil-éster-diacetato-carboxifluoresceína (CFSE). As stem cells mesenquimais (SCMs) obtidas de medula óssea humana serão cultivadas até o segundo subcultivo quando será realizada sua caracterização através de citometria de fluxo. As SCMs serão então induzidas a se diferenciar em células epiteliais da córnea, através do contato com meio condicionado de culturas de células de limbo corneano, com posterior estudo por citometria de fluxo, para confirmar sua transdiferenciação. As SCMs não diferenciadas e diferenciadas em ceratinócitos serão semeadas sobre a Nanoskin, que será estudada quanto à aderência celular em microscopia eletrônica de varredura e quanto à viabilidade celular pelo teste do MTT. Será também desenvolvido um estudo ex vivo com córneas de coelhos em cultura de órgãos, que serão submetidas à desepitelização química e colocação do scaffold com as SCMs sobre as áreas lesadas, a fim de se estudar sua integração, através da marcação com anticorpo antinúcleo humano que permitirá avaliar a presença de células humanas reepitelizando as lesões. (AU)