Papel das modificações epigenéticas induzidas pelos AGCCs em células epiteliais intestinais

Resumo

Ácidos graxos de cadeia curta (AGCCs, principalmente acetato, propionato e butirato) são metabólitos bacterianos produzidos pela fermentação das fibras alimentares no trato intestinal. Estes nutrientes modulam a produção de mediadores inflamatórios incluindo quimiocinas, citocinas e peptídeos antimicrobianos pelas células epiteliais intestinais. Neste projeto, nosso objetivo é o estabelecimento de um modelo in vitro de cultura de organoide intestinal murino no intuito de investigar modificações epigenéticas causadas pelos AGCCs e as influências destas na expressão de genes inflamatórios. Para isso, organoides intestinais murinos serão incubados em quatro diferentes concentrações: 1) sem AGCCs (grupo controle); 2) com um mix de AGCCs em baixas concentrações (6 mM de acetato, 1 mM de propionato e 1 mM de butirato) simulando o perfil intestinal de animais tratados com antibióticos; 3) com um mix de AGCCs em concentrações normalmente encontradas no intestino dos animais (50 mM de acetato, 10 mM de propionato e 10 mM de butirato); 4) com um mix de AGCCs em altas concentrações (59 mM de acetato, 19 mM de propionato e 17 mM de butirato) simulando o perfil intestinal de animais com alta ingestão de fibras. Nós iremos analisar o crescimento e a viabilidade dos organoides incubados nas condições descritas acima. Adicionalmente, vamos realizar análises de transcriptoma (expressão de mRNA, mRNA-seq) para determinar o perfil de ativação/desativação de genes, quanto as análises das modificações epigenéticas serão realizadas por imunopreciptação da cromatina (ChIP) e western blot. (AU)