Caracterização funcional de uma catepsina recombinante da formiga cortadeira Atta sexdens

Resumo

As catepsinas são enzimas da família das cisteíno proteases, que são amplamente distribuídas nos organismos e estão relacionadas com diversos processos fisiológicos onde atuam no turnover de proteínas e como moléculas reguladoras e sinalizadoras. Em insetos, as catepsinas L têm sido relacionadas com o remodelamento de tecidos o que implica em importantes funções dessas enzimas no desenvolvimento e sobrevivência dos insetos. Com o sequenciamento dos genomas de duas formigas cortadeiras, Acromyrmex echinatior e Atta cephalotes, foram anotadas três sequências com identidade com catepsinas L. No entanto, apesar da anotação dos genes, de nosso conhecimento, não há relato de estudos de produção e caracterização de catepsinas de formigas na literatura. Assim, para contribuir para o conhecimento desta classe de enzimas em formigas cortadeiras, o presente projeto tem como proposta obter uma catepsina recombinante de Atta sexdens e caracterizá-la do ponto de vista bioquímico e cinético. Para isso, oligonucleotídeos serão desenhados baseado nas sequências de catepsinas de formigas cortadeiras depositadas nos bancos de dados e o DNA será amplificado por PCR a partir de RNA de A. sexdens. O sistema de expressão da enzima recombinante será o de Pichia pastoris, que deverá permitir a expressão da enzima na forma solúvel e ativa. Futuramente, com o desenvolvimento da metodologia de obtenção da enzima recombinante, esta poderá ser usada na busca de inibidores e também ser avaliada em relação a sua possível atividade inseticida.Este projeto de mestrado faz parte do Projeto 'Estudos de vias metabólicas importantes no controle de formigas cortadeiras', coordenado pela Profa. Dulce Helena F. Souza e financiado pela Fapesp (processo 2014/12169-2).