Estudo proteômico dirigido da localização e translocação subcelular de proteínas na transição epitélio-mesenquimal

Resumo

O proteôma é um sistema multidimensional e altamente dinâmico, no qual cada proteína apresenta várias propriedades interconectadas, que conjuntamente representam o fenótipo de uma célula ou organismo. A medida precisa destas propriedades é algo particularmente desafiador devido a diversidade e dinâmica das proteínas. Com os avanços em espectrometria de massas voltada ao estudo de proteômas, várias medidas de abundância, localização celular, síntese/degradação, modificações pós-traducionais, etc, começam a ser analisadas de maneira integrada, permitindo uma melhor compreensão de processos fisiológicos e celulares. Especificamente, a localização subcelular de proteínas e o seu tráfico entre subcompartimentos representam fatores fundamentais para a correta função das mesmas, pois a localização aberrante de proteínas contribui para a patogênese de diversas doenças humanas, entre elas o câncer. Em várias situações, esta localização aberrante está associada a presença de modificações pós-traducionais e/ou de interações proteína-proteína não comuns. Portanto, o estudo proteômico multidimensional é uma ferramenta importante para a compreensão de mecanismos patogênicos. Neste contexto, o presente projeto objetiva avaliar quantitativamente alterações na localização de proteínas, bem como as potenciais modificações pós-traducionais responsáveis por estas alterações, associadas ao processo de metástase do câncer. Para tal, serão utilizados modelos de indução da transição epitélio-mesenquimal (EMT) em linhagens de adenocarcinoma já estabelecidos em nosso grupo para representar a progressão e metástase do câncer. As alterações multidimensionais do proteôma serão avaliadas pela combinação de métodos de fracionamento subcelular e proteômica dirigida, a fim de gerar perfis de correlação proteica (PCPs), possibilitando uma análise quantitativa, temporal e, consequentemente, de processos de transporte e translocação entre subcompartimentos celulares. A inibição funcional ou knockout/knockdown de proteínas-alvo permitirá validar o papel da alteração de localização subcelular na regulação de processos biológicos importantes para a EMT. Este projeto promove, portanto, além do desenvolvimento de métodos proteômicos multidimensionais modernos para análise de mecanismos celulares complexos, a verificação e estudo de processos potencialmente relevantes para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas para detectar e prevenir a metástase do câncer. (AU)