Obtenção de eritrócitos a partir de células-tronco de pluripotência induzida em cultivo feeder-free com meio xeno-free

Resumo

A hematopoiese é o processo de formação dos componentes celulares do sangue a partir da diferenciação das células-tronco hematopoiéticas (HSC). As HSCs são encontradas na medula óssea humana adulta a uma proporção de 1 células em cada 106. A dificuldade na obtenção dessas células e na determinação de um protocolo para o seu cultivo ex vivo nos leva a buscar fontes alternativas para a produção de células maduras do sangue. As células-tronco de pluripotência induzida (iPS) são células com potencial para diferenciação em todos os tipos celulares do organismo adulto. Desta forma, a indução da diferenciação de células iPS em células hematopoiéticas é uma forma alternativa para a produção de eritrócitos in vitro. A produção dessas células vermelhas do sangue in vitro é necessária para o estudo de doenças, desenvolvimento de terapias e aplicações clínicas que envolvam esse tipo celular. No entanto, para que essas células tenham potencial para aplicações clínicas futuras é necessário que, entre outros requisitos, estas sejam cultivadas sem o uso de células alimentadoras e de moléculas de origem animal. O presente estudo propõe a produção de eritrócitos a partir de células-tronco de pluripotência induzidas em cultivo livre de células alimentadoras e em meio livre de moléculas de origem animal. A diferenciação hematopoiética será induzida pelo método de formação de corpos embrioides por spin e, posteriormente, será realizada a indução da diferenciação eritroide. Ao longo da diferenciação das células iPS, o desenvolvimento hematopoiético e eritroide será monitorado através de análises de formação de colônia e por citometria de fluxo. Também serão realizadas análises para verificação da expressão de genes relacionados as hemoglobinas, através de RT-PCR em tempo real, e análises da composição de hemoglobinas nos eritrócitos produzidos, através da técnica de cromatografia líquida de alta eficiência por troca catiônica (HPLC). (AU)