Modificação de linfócitos T com receptor de antígenos quimérico anti-CD19

Resumo

Imunoterapia com linfócitos T modificados para expressarem receptores de antígenos quiméricos (CAR) tem se mostrado eficaz na remissão de leucemia linfoide aguda (ALL) em crianças e jovens adultos. Os CAR possuem um domínio extracelular derivado de regiões variáveis de anticorpos e domínios intracelulares de co-estimulação de linfócitos T. A proteína CD19 tem se mostrado o alvo ideal para as terapias com CAR, pois está presente apenas na superfície de linfócitos B e células dendríticas foliculares além de possuir elevada expressão em praticamente todos os tipos de leucemias. O presente estudo propõe a produção de linfócitos T CAR anti-CD19, com 4-1BB como domínio intracelular de co-estimulação. Inicialmente será realizada a validação desta produção com utilização de linhagens celulares de linfócitos T Jurkat ou NK-92, que serão transduzidas com vetores lentivirais produzidos em Hek293T. A expressão do CAR será verificada através de citometria de fluxo, e a atividade citotóxica das linhagens modificadas será avaliada em co-cultivo com linhagens de linfócitos B CD19+ Raji ou Namalwa. Assim que a produção for validada em linhagens celulares, terá início a modificação de linfócitos T isolados de sangue periférico de indivíduos saudáveis. O isolamento de linfócitos T será feito com beads magnéticas acopladas com anticorpos anti-CD3 e a ativação destas células ocorrerá em cultivo com interleucina IL-2 e beads conjugadas a anticorpos anti-CD3 e anti-CD28. Os linfócitos T ativados serão transduzidos com os mesmos vetores lentivirais. A expressão de CAR e a atividade contra linhagens de linfócitos B serão avaliadas como na validação. Além destas avaliações, um ensaio de citotoxicidade será conduzido, no qual os linfócitos T CAR serão incubados com células mononucleares de sangue periférico.