Estudos funcionais do sistema de secreção do tipo VI de Chromobacterium violaceum

Resumo

Os sistemas de secreção são maquinarias especializadas presentes em diversas bactérias Gram-negativas, responsáveis pela translocação de proteínas do interior do citoplasma para fora da célula bacteriana. O sistema de secreção do tipo VI (T6SS) é um aparato contráctil que entrega proteínas efetoras tóxicas em uma maneira dependente de contato diretamente no interior de células alvo procarióticas ou eucarióticas. Este sistema é utilizado por bactérias em relações antagonistas contra bactérias competidoras ou contra hospedeiros eucarióticos. A Chromobacterium violaceum, uma beta-proteobactéria de vida livre capaz de atuar como patógeno oportunista em humanos, possui em seu genoma um cluster gênico organizado em dois operons que codificam um potencial T6SS, mas a função deste sistema permanece completamente desconhecida nesse organismo. Este projeto tem como objetivo caracterizar o T6SS de C. violaceum a fim de desvendar quais são seus efetores, como se dá sua regulação e quais as vantagens que este sistema oferece para a sobrevivência desta bactéria no ambiente ou durante uma infecção. Para identificar as proteínas efetoras translocadas pelo T6SS será feita análise proteômica desta bactéria comparando o secretoma das linhagens selvagem e mutantes do T6SS. A análise da expressão gênica in vivo e in vitro dos operons do T6SS em diferentes condições permitirá entender como se dá sua regulação a nível transcricional. Ensaios em cultura de células e com modelo murino e de competição bacteriana usando as linhagens selvagem e mutantes do T6SS também serão realizados. Juntos, os resultados obtidos possibilitarão entender o papel do T6SS nas relações de C. violaceum com outras bactérias e com o hospedeiro. (AU)