Engenharia genética de macrófagos para aquisição de fenótipo Phd2+/- a partir das células-tronco pluripotentes induzidas e seu uso para tratamento de Isquemia de Membro

Resumo

Entre os principais objetivos do projeto temático estão a modulação dos macrófagos por CSFs para promover mais a formação de macrófagos M2, pois, estas células produzem uma série de fatores de crescimento que promovem a formação e o remodelamento de vasos, e miogênese do músculo esquelético isquêmico e inflamado. O principal sensor de oxigênio nas células é a hidroxilase de prolina de HIF (Hypoxia Inducible Factor), a qual é denominada de PHD, e acredita-se que a PHD2 seja a principal isoforma nesta atividade. PHD2 é uma dioxigenase dependente de Fe(II)/2-oxoglutarato que catalisa a hidroxilação de resíduos específicos de prolina do HIF-5ü, que leva a degradação via ubiquitina. Já foi relatado que os macrófagos haplodeficientes do gene Phd2 (Phd2+/-) apresentam um fenótipo de M2-símile e promovem arteriogênese nos animais isquêmicos. Portanto, estes macrófagos podem ser usados para terapia celular para tratamento de Isquemia de Membro, no entanto, como não há macrófagos Phd2+/- naturalmente uma via de produção seria a criação e produção a partir de iPS. Nos dois trabalhos publicados recentemente com apoio deste projeto temático, nós demonstramos que o biomaterial alginato é um ótimo material para carrear vetor lentiviral e liberar lentamente este vetor no local de injeção. Além disso, esta via de entrega de vetores permitiu a contenção deste vetor no local da injeção, o que é uma questão altamente relevante em questão de biossegurança. Como a injeção da suspensão de macrófagos no tecido muscular pode levar a perda destas células levando a diminuição de eficácia e do tempo de atuação, uma solução seria entregar estas protegidas de microgéis de alginato, conforme nós demonstramos no trabalho anterior com o vetor lentiviral. Os objetivos deste projeto são criação dos macrófagos com o fenótipo Phd2+/- a partir das células-tronco pluripotentes induzidas modificadas por Crispr-Cas9 e avaliação do efeito terapêutico destes macrófagos, na forma livre ou no gel de alginato, nos membros isquêmicos dos camundongos. (AU)