Análise das consequências do knockdown da proteína Argonauta-2 na sinaptogênese in vitro

Resumo

A retina possui uma morfologia complexa e é composta por mais de 60 tipos celulares altamente especializados para a transdução e modulação da informação luminosa, sendo a transmissão dessa informação coordenada por sinapses químicas e elétricas. Um fator fundamental para o desenvolvimento, maturação celular e sinaptogênica são os pequenos RNAs não-codificantes, também conhecidos como microRNAs (miRNAs). Os miRNAs são responsáveis pela regulação da expressão de genes através da interação com os RNAs mensageiros (RNAm) complementares. Em seu processo de atuação, destaca-se o complexo de silenciamento induzido por RNAs (RISC), composto por diversas proteínas, dentre elas a proteína Agonauta-2 (AGO2), que guia o miRNA ao RNAm-alvo, podendo atuar na clivagem do RNAm-alvo e em sua degradação. Estudos recentes apresentam outras funções atribuídas à AGO2, como papel ativo no desenvolvimento e regeneração axonal e na formação dos cones de crescimento. Entretanto, o papel da AGO2 na sinaptogênese retiniana ainda não é totalmente elucidado. Assim, o objetivo desse projeto é analisar as consequências do knockdown da proteína AGO2 na sinaptogênese invitro. Para isso, culturas de células primárias retinianas serão transfectadas com o plasmídeo de inibição de AGO2(pLKO.1puro-AGO2), e as consequências na sinaptogênese serão avaliadas por imunofluorescência e western blotting.Com este projeto, pretendemos avaliar a distribuição de proteínas sinápticas, bem como a morfologia dos dendritos e axônios, após o knockdown da proteína AGO2 em células da retina in vitro.