Papel de IP3R1 na neuroinflamação desencadeada pela retinose pigmentar

Resumo

A retina é um neuroepitélio fotossensível encontrado na região interna do olho considerado um componente integral do sistema nervoso central (SNC). Um desequilíbrio nas condições fisiológicas ou alterações no número de fotorreceptores funcionais pode levar a importantes défices visuais. Uma das doenças que praticamente leva a deficiências visuais é a retinite pigmentosa (RP). Entre as causas de RP autossômica recessiva encontram-se mutações no gene PDE6B, culminando na morte celular inicial dos fotorreceptores de tipo bastonete e subsequente degradação dos cones. No entanto, os processos subjacentes à morte primária dos bastonetes não são completamente conhecidos, embora estudos apontam para mecanismos envolvidos na resposta inflamatória, stress oxidativo e metabólico, factores epigenéticos, e desregulação do cálcio. Entre estes últimos, o receptor de inositol-1,4,5-trifosfato de tipo 1 (IP3R1), responsável pela homeostase intracelular do cálcio, poderia participar na progressão desta patologia. O IP3R1 está associado a vários eventos celulares importantes, tais como a morte e proliferação celular. Em modelos animais para RP autossômica recessiva, foram descritas várias alterações relacionadas com a desregulação do cálcio, como a sobrecarga do retículo mitocondrial e endoplasmático, afetando o metabolismo dos fotorreceptores. Neste cenário, este projeto visa analisar os efeitos do bloqueio farmacológico do IP3R1 num modelo animal de RP autossômico recessivo e de culturas celulares in vitro, concentrando-se em análises de aspectos morfométricos e inflamatórios. O bloqueio farmacológico será efetuado utilizando o medicamento 2-APB por injeção subretiniana. Para analisar os efeitos causados pela intervenção, serão utilizadas técnicas de imunofluorescência para análise de localização de proteínas, acompanhadas da análise dos níveis de proteínas por western blot. Também serão utilizadas experiências in vitro para avaliar a neuroinflamação e o papel da resposta glial IP3R1. O ensaio de esferas multiplex será utilizado para determinar a resposta inflamatória combinada com marcadores celulares específicos. Finalmente, analisaremos a morte celular por apoptose, utilizando o ensaio TUNEL. Com este estudo, planejamos avaliar o papel da proteína IP3R1 na progressão da RP e o seu papel nos processos neuroinflamatórios, o que pode abrir perspectivas para terapias centradas na desregulação do cálcio. (AU)