Clonagem e preparação de retrovírus para super expressão de EZH2 em cultura primária de cristalino

Resumo

EZH2 (do inglês Enhancer of zeste homolog 2) é um componente enzimático do complexo repressivo Polycomb (PRC) 2. Este foi descrito primeiramente com responsável pela repressão transcricional através da metilação na lisina 27 da histona H3 (H3K27me3), embora, recentemente, outras funções foram descritas. Apesar de estudos anteriores relacionarem EZH2 com alterações neoplásicas, a função dessa enzima permanece pouco conhecida no sistema nervoso. Alteração genética mediada por retrovírus é uma ferramenta molecular de grande valia para a descrição funcional de genes específicos, visto que este vírus possui uma única fita simples de RNA genômico que pode ser integrado a uma dupla-fita de DNA em uma célula alvo. Essa capacidade viral permite o uso dessa maquinaria como um vetor para promover alterações permanentes no genoma da célula hospedeira. O objetivo desse projeto é preparar retrovírus recombinantes para a super expressão de EZH2 em cultura primária de células do cristalino, visando aprender a técnica para futura aplicação em culturas de neurônios da medula espinhal. (AU)