Avaliação da autofagia como mecanismo limitante da eficiência terapêutica de inibidores farmacológicos de FLT3 em leucemia mieloide aguda

Resumo

Mutações no gene FLT3 atingem cerca de 30% dos pacientes com leucemia mieloide aguda (LMA), sendo a FLT3-ITD a mais frequente e relacionada a um pior prognóstico. O desenvolvimento de inibidores de FLT3 representou um avanço no tratamento da leucemia mieloide aguda (LMA), pois reduzem a proliferação celular e melhoram a sobrevida dos pacientes. Contudo, a limitação clínica no tratamento com essas drogas representa uma oportunidade de investigar combinações de fármacos que resultem em melhores resultados terapêuticos. O presente estudo, portanto, tem como objetivo comprovar que inibidores de FLT3 induzem autofagia e que a terapia combinada com inibidores da autofagia potencializam o efeito anti-leucêmico dos inibidores de FLT3. Investigaremos os efeitos do tratamento com midostaurin e quizartinib como monoterapia ou combinados a bafilomicina, cloroquina e ROC-325 em ensaios in vitro. Para isso, serão utilizadas as linhagens celulares MV4-11 e MOLM13 e células primárias de pacientes com LMA. Ensaios funcionais serão realizados para avaliar os efeitos anti-leucêmicos e autofágicos por meio de silenciamento gênico, citometria de fluxo, western blotting, expressão gênica e microscopia eletrônica. Para análise da viabilidade, proliferação e morte celular, serão realizados os ensaios com MTT, Ki67 e AnexinaV/Iodeto de Propídio. As análises dos resultados serão realizadas pelo software GraphPad Prism 5, utilizando os testes estatísticos adequados. Os valores de p serão ajustados para 0,05. Espera-se, portanto, comprovar que os inibidores de FLT3 induzem autofagia e que a terapia combinada com inibidores de autofagia potencializa o efeito anti-leucêmico dos inibidores de FLT3.