Telômeros e pirofosfatos de inositol poderiam exercer papéis importantes na metaciclogênese e virulência de Leishmania?

Resumo

As leishmanioses referem-se a um grupo de doenças causadas por parasitos do gênero Leishmania, a qual afeta principalmente pessoas em estado de vulnerabilidade social. Atualmente, os fármacos disponíveis para tratamento contribuem para o aparecimento de outras comorbidades clínicas devido aos seus efeitos colaterais, o que torna a busca por novos alvos terapêuticos fundamental. Em eucariotos modelo, os pirofosfatos de inositol (PP-IPs), principalmente IP7 e IP8, estão envolvidos em uma ampla gama de processos celulares, como regulação do comprimento dos telômeros e recombinação homóloga (HR). No entanto, as proteínas-alvo dos PP-IPs, assim como seu mecanismo de ação, ainda são questões abertas. IP7 e IP8 são sintetizados por vias envolvendo a participação das quinases IP6K e PP-IP5K, respectivamente. Parasitos tripanossomatídeos não possuem genes ortólogos para PP-IP5K, o que os torna excelentes modelos para o estudo de IP7. Assim, nossa hipótese é que os PP-IPs (principalmente IP7) desempenham um importante papel na dinâmica telomérica em Leishmania, organismo que possui alta capacidade proliferativa. Nós também suspeitamos que os PP-IPs possam participar de outras vias metabólicas nesse organismo. Assim, pretendemos aplicar abordagens envolvendo perda de função gênica da quinase IP6K (responsável pela síntese de IP7) e telomerase (responsável pelo elongamento telomérico) utilizando a técnica CRISPR/Cas9 e posteriormente realizar ensaios que permitam avaliar a possível correlação dos PP-IPs com os telômeros. Iremos também avaliar a perfil de expressão total e de célula única (single-cell) durante a metaciclogênese através de ensaios de transcriptômica para rastrear possíveis vias que possam estar sendo alteradas devido a diminuição de IP7 e/ou telomerase. Ensaios de metabolômica também serão realizados para este intuito. Por fim, supondo que haja um fenótipo diferencial e que IP6K possa ser um possível alvo para o desenvolvimento de fármacos, realizaremos análises de virulência para avaliar a capacidade infectiva nas linhagens de Leishmania geradas. Os dados obtidos a partir deste projeto nos permitirá compreender melhor a função dos PP-IPs, bem como a dinâmica telomérica deste parasito. Além disso, nossos resultados poderão abrir novos caminhos para o desenvolvimento de alvos terapêuticos específicos no combate às leishmanioses, uma vez que quinases são excelentes alvos para o desenvolvimento de fármacos e os telômeros são considerados o relógio molecular das células eucarióticas. (AU)