Desenvolvimento de ferramentas moleculares para o estudo de parasitas emergentes em Leishmaniose Visceral

Resumo

A Leishmaniose é uma doença endêmica e negligenciada causada por mais de 20 espécies de protozoários do gênero Leishmania, sendo transmitidas aos humanos por vetores flebotomíneos. A Leishmaniose Visceral (LV) é provocada pela espécie Leishmania infantum, uma doença grave que acomete órgãos como o baço, a medula óssea, o fígado e os linfonodos podendo ser fatal quando não diagnosticada corretamente e tratada. O Brasil é um dos países endêmicos para as Leishmanioses e possui elevada taxa de prevalência para a LV na região Nordeste. O tratamento indicado é por administração de anfotericinas e antimoniais pentavalentes, porém estudos demonstram a resistência desses parasitas a essas drogas e a suscetibilidade pode estar associada à condição imunológica do hospedeiro e possíveis co-infecções por outros patógenos. Recentemente, em resultado publicado pelo nosso grupo foi identificado parasitos não-Leishmania isolados em cultura (promastigota) de um caso atípico e fatal de LVH em paciente HIV negativo. A partir de análises filogenômicas de isolados clínicos de um mesmo paciente, obtidos de aspirado de medula óssea e lesões da pele, verificamos que estes protozoários são mais semelhantes à Crithidia fasciculata, espécie monoxênica de tripanossomatídeo que parasita exclusivamente insetos culicídeos. Análises de filogenética molecular utilizando sequências de nucleotídeos da região 18S do RNA ribossomal (SSU-rRNA) e mais recentemente dados genômicos de outros isolados clínicos de LV da mesma região, mostram o mesmo resultado para vários casos diferentes, i.e., parasitos Crithidia-like sendo isolados de pacientes diagnosticados com LV. Diante disso, existe a necessidade de desenvolver métodos de identificação correta das espécies envolvidas na infecção e que essa detecção possa ser espécie-específica, a fim de investigar possíveis quadros de co-infecção. É de extrema importância para os pacientes e para saúde pública realizar o diagnóstico preciso e o manejo clínico adequado. Ainda, é necessário avaliar experimentalmente o potencial de infecção de parasitos Crithidia-like e no contexto de co-infecção com L. infantum. Para tanto é necessário o desenvolvimento de métodos de Biologia Molecular direcionados a essas espécies para compreender e elucidar estes casos severos e atípicos de LVH recorrentes em área endêmica do Nordeste do Brasil. Deste modo, neste projeto será padronizado um método de detecção e quantificação de parasitos Crithidia-like e L. infantum por real-time qPCR, além de construir uma cepa Crithidia-like expressando gene repórter fluorescente para avaliar as infecções por esse parasito. Essas ferramentas serão importantes para entender o desfecho dessas infecções, além do método de qPCR pode ser aplicado como nova alternativa para diagnóstico molecular. (AU)