Avaliação da toxicidade hepática aguda e inflamação induzida por nitrosaminas em Mus musculus e Danio rerio

Resumo

As nitrosaminas são compostos classificados como contaminantes emergentes, carcinogênicos e oxidantes. Podem alterar as propriedades das membranas celulares e induzir um aumento dos lípidos biologicamente ativos, como o ácido araquidónico e o PAF, um potente agente pró-inflamatório capaz de induzir o aparecimento de doenças hepáticas. Neste trabalho, utilizaremos duas nitrosaminas (N-Nitrosodietilamina e N-Nitrosodimetilamina), escolhidas por serem as mais encontradas comercialmente, para induzir inflamação e hepatotoxicidade aguda em espécimes de Mus musculos, estas serão expostas a diferentes concentrações de cada uma das nitrosaminas, para realizar análises bioquímicas, histológicas e hematológicas subsequentes que mostrarão possíveis danos hepáticos induzidos pela exposição a estes contaminantes. Amostras do sangue dos camundongos serão coletadas, e subsequentemente, o fígado será submetido a uma avaliação histológica. Uma alíquota da reserva de sangue coletada dos grupos expostos e não expostos a nitrosaminas será submetida a análise hematológica, utilizando técnicas de esfregaço e subsequente contagem de células em câmara Neubauer. Outra alíquota será utilizada para análise bioquímica da desidrogenase láctica, transaminase oxalacetica (TGO), transaminase pirúvica (TGP), gama-glutamil transferase (GGT), e proteína C reactiva, para monitorar possíveis alterações hepáticas. Além disso, avaliaremos os níveis de interleucina 6 (IL-6), o fator de necrose tumoral alfa (TNF alfa), os níveis de malondialdeído (MDA), e a enzima fosfolipase A2 associada a lipoproteína (Lp-PLA2), também conhecida como fator de ativação plaquetária acetil-hidrolase (PAF-AH), pois esta é crucial no processo de controle da inflamação, sendo considerada uma proteína anti-inflamatória, uma vez que a PAF-AH atua regulando os níveis plasmáticos do fator de ativação plaquetária (PAF), um fator lipídico extremamente importante na progressão e desenvolvimento do processo inflamatório. Assim, o presente projeto visa mostrar que as nitrosaminas são agentes que podem induzir disfunção hepatocitária, que podem afetar o metabolismo energético e que o fator de ativação plaquetária (PAF) seria um importante agente causador de hepatotoxicidade. Para além destas investigações in vivo e bioquímicas, utilizaremos técnicas de acoplamento molecular que serão feitas no nosso laboratório e dinâmica molecular, estas serão feitas na BioSIM (Universidade do Porto) para investigar a capacidade das nitrosaminas como potencial inibidor não selectivo das enzimas LPCAT e PAF-AH. Uma vez que a nitrosamina é um composto comum produzido em ambientes aquáticos, também realizaremos ensaio de CL50% dos compostos e monitoração de modificações hematológicas e histológicas hepáticas induzidas por ambos os compostos no peixe Danio rerio.