A real-time RT-PCR for rapid detection and quantification of mosquito-borne alphaviruses

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Romeiro, Marilia Farignoli ; de Souza, William Marciel ; Tolardo, Aline Lavado ; Vieira, Luiz Carlos ; Henriques, Dyana Alves ; de Araujo, Jansen ; Hassegawa Siqueira, Carlos Eduardo ; Colombo, Tatiana Elias ; Aquino, Victor Hugo ; Lopes da Fonseca, Benedito Antonio ; de Morais Bronzoni, Roberta Vieira ; Nogueira, Mauricio Lacerda ; Durigon, Edison Luiz ; Moraes Figueiredo, Luiz Tadeu

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: ARCHIVES OF VIROLOGY; v. 161, n. 11, p. 3171-3177, NOV 2016.
• Citações Web of Science: 1

Resumo

Mosquito-borne alphaviruses are widely distributed throughout the world, causing important human illnesses. Therefore, the development of methods to enable early diagnosis of infections by alphavirus is essential. We show here the development and evaluation of a quantitative real-time RT-PCR using genus-specific primers to the nsP1 viral gene of all mosquito-borne alphaviruses. The specificity and sensitivity of the assay were tested using seven alphaviruses and RNA transcribed from Venezuelan equine encephalitis virus. The detection limits of real-time RT-PCR ranged from 10 to 76 copies per ml. The melting temperature (T-M) values for amplification of the alphavirus genomes were 83.05 A degrees C and 85.28 A degrees C. Interestingly, the assay suggested the possibility the arthritogenic alphaviruses with T-M peaks of 84.83 to 85.28 A degrees C and encephalitic alphaviruses of 83.34 A degrees C to 84.68 A degrees C could be discriminated both diseases. Real-time RT-PCR may prove very useful for the screening and preliminary diagnosis in outbreaks and surveillance studies as well as for measuring the viral load in pathogenesis studies. (AU)

• Processo FAPESP: 12/24150-9 - Pesquisa de vírus em roedores silvestres, mosquitos e carrapatos
• Beneficiário: William Marciel de Souza
• Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Processo FAPESP: 13/14929-1 - Detecção de arbovírus e outros vírus de RNA por RT-PCR em tempo real e estudo do viroma
• Beneficiário: Luiz Tadeu Moraes Figueiredo
• Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Processo FAPESP: 14/20851-8 - Estudo sobre infecções por Alphavirus e Flavivirus em amostras de Banco de Sangue
• Beneficiário: Marilia Farignoli Romeiro
• Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Processo FAPESP: 14/15079-4 - Pesquisa de vírus de RNA em amostras séricas e artrópodes
• Beneficiário: Luiz Carlos Vieira
• Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Processo FAPESP: 12/02836-6 - Desenvolvimento de técnicas de RT-PCR em tempo real para arbovírus causadores de doença humana e identificação destes com base na sequência nucleotídica
• Beneficiário: Marilia Farignoli Romeiro
• Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Processo FAPESP: 13/02256-2 - Desenvolvimento de RT-PCR em tempo real para diagnóstico de infecções por vírus Piry e outros Vesiculovirus
• Beneficiário: Aline Lavado Tolardo
• Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Mestrado