Avaliação de três métodos de extração de DNA de material parafinado para amplificação de DNA genômico pela técnica da PCR

Autor(es)

Ricardo Alves MESQUITA ^[1] ; Evelyn K. ANZAI ^[2] ; Rogério Nogueira OLIVEIRA ^[3] ; Fábio Daumas NUNES ^[4]

Afiliação do(s) autor(es)

^[1] Universidade de São Paulo. Faculdade de Odontologia

^[2] Universidade de São Paulo. Faculdade de Odontologia

^[3] Universidade de São Paulo. Faculdade de Odontologia

^[4] Universidade de São Paulo. Faculdade de Odontologia

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: Pesquisa Odontológica Brasileira; v. 15, n. 4, p. 314-318, 2001-12-00.

Resumo

Existem na literatura vários protocolos para extração de DNA genômico a partir de material fixado em formol e embebido em parafina. A obtenção de DNA genômico é importante para realização de experimentos em biologia molecular, dentre eles a PCR. Este trabalho teve por objetivo otimizar a extração de DNA genômico a partir de material fixado (hiperplasia fibrosa inflamatória) e não-fixado (mucosa bucal normal) em formol, comparando-se três metodologias diferentes: fenol com digestão enzimática, partículas de sílica com e sem digestão enzimática. Para amplificação do DNA pela técnica da PCR, utilizou-se iniciadores para o éxon 7 da citoqueratina humana tipo 14. O sucesso da amplificação foi verificado pela eletroforese do produto em gel de poliacrilamida 8% contendo glicerol 5% corado com prata. Obteve-se amplificação do DNA genômico extraído com fenol/digestão enzimática e com partículas de sílica/digestão enzimática, para ambos tecidos utilizados. O método padronizado tem potencial para auxiliar no diagnóstico histopatológico, assim como no estudo retrospectivo de material de arquivo. (AU)

• Processo FAPESP: 97/13228-5 - Expressão diferencial de genes envolvidos no desenvolvimento craniofacial durante a formação do processo maxilar de embriões de camundongo: comparação com animal transgênico portador de deformidades craniofaciais
• Beneficiário: Fabio Daumas Nunes
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular