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(Referência obtida automaticamente do Web of Science, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores.)

Cloning, expression, and purification of the virulence-associated protein D from Xylella fastidiosa

Texto completo
Autor(es):
Catani, Cleide Ferreira [1] ; Azzoni, Adriano Rodrigues ; Paula, Débora Pires ; Tada, Susely Ferraz Siqueira [4] ; Rosselli, Luciana Kauer [5] ; Souza, Anete Pereira de [6] ; Yano, Tomomasa
Número total de Autores: 7
Afiliação do(s) autor(es):
[1] Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia - Brasil
[4] Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia - Brasil
[5] Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). COCEN. Centro de Biologia Molecular e Engenharia Genética - Brasil
[6] Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia - Brasil
Número total de Afiliações: 7
Tipo de documento: Artigo Científico
Fonte: Protein Expression and Purification; v. 37, n. 2, p. 320-326, Oct. 2004.
Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
Assunto(s):Proteínas   Vetores de doenças de plantas   Bactérias
Resumo

In this study, an efficient expression system, based on the pET32Xa/LIC vector, for producing a Xylella fastidiosa virulence-associated protein D, found to have a strong similarity to Riemerella anatipestifer and Actinobacillus actinomycetencomitans VapD protein, is presented. The protein has a molecular mass of 17.637 Da and a calculated pI of 5.49. The selected XFa0052 gene was cloned in the pET32Xa/LIC vector and the plasmid was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) strain at 37 °C, with an induction time of 2 h and 1 mM IPTG concentration. The protein present in the soluble fraction was purified by immobilized metal affinity chromatography (IMAC), and had its identity determined by mass spectrometry (MALDI-TOF) and N-terminal sequencing. The purified protein was found as a single band on SDS-PAGE and its correct folding was verified by circular dichroism spectroscopy. (AU)

Processo FAPESP: 01/07533-7 - Resolução da estrutura tridimensional de proteínas relacionadas à patogenicidade de Xyllela fastidiosa
Beneficiário:Anete Pereira de Souza
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo FAPESP: 01/08002-5 - Rede de Biologia Molecular Estrutural - SMolBNet
Beneficiário:Cleide Ferreira Catani
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado