Hyperglycosylation impairs the inhibitory activity of rCdtPLI2, the first recombinant beta-phospholipase A₂ inhibitor

Autor(es)

Wiezel, Gisele A. ; Oliveira, Isadora S. ; Ferreira, Isabela G. ; Bordon, Karla C. F. ; Arantes, Eliane C.

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: International Journal of Biological Macromolecules; v. 280, p. 12-pg., 2024-09-22.

Resumo

Crotoxin, a phospholipase A(2) (PLA(2)) complex and the major Crotalus venom component, is responsible for the main symptoms described in crotalic snakebite envenomings and a key target for PLA(2) inhibitors (PLIs). PLIs comprise the alpha, beta and gamma families, and, due to a lack of reports on beta-PLIs, this study aimed to heterologously express CdtPLI2 from Crotalus durissus terrificus venom gland to improve the knowledge of the neglected beta-PLI family. Thereby, recombinant CdtPLI2 (rCdtPLI2) was produced in the eukaryotic Pichia pastoris system to keep some native post-translational modifications. rCdtPLI2 (similar to 41 kDa) presents both N- and O-linked glycans. Alpha-mannosidase digested-rCdtPLI2 (1 mol) strongly inhibited (73%) CB-Cdc catalytic activity (5 moles), demonstrating that glycosylations performed by P. pastoris affect rCdtPLI2 action. Digested-rCdtPLI2 also inhibited PLA(2)s from diverse Brazilian snake venoms. Furthermore, rCdtPLI2 (1 mol) abolished the catalytic activity of Lmr-PLA(2) (5 moles) and reduced the CTx-Cdc (5 moles) enzyme activity by 65%, suppressing basic and acidic snake venom PLA(2)s. Additionally, crotalic antivenom did not recognize rCdtPLI2, suggesting a lack of neutralization by antivenom antibodies. These findings demonstrate that studying snake venom components may reveal interesting novel molecules to be studied in the snakebite treatment and help to understand these underexplored inhibitors. (AU)

• Processo FAPESP: 21/11936-3 - Centro de Ciência Translacional e Desenvolvimento de Biofármacos
• Beneficiário: Benedito Barraviera
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Centros de Ciência para o Desenvolvimento
• Processo FAPESP: 09/54098-6 - EMU: aquisição de um espectrômetro de massas para geração de imagens na Central de Espectrometria de Massas (mass-facility) da FCFRP-USP: estudos de localização molecular de substâncias biologicamente ativas
• Beneficiário: Norberto Peporine Lopes
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Programa Equipamentos Multiusuários
• Processo FAPESP: 19/10173-6 - Produção, modificação e caracterização de toxinas animais com potencial aplicação biotecnológica
• Beneficiário: Eliane Candiani Arantes Braga
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Processo FAPESP: 20/13176-3 - Descoberta de anticorpos monoclonais humanos (scFv) com reatividade cruzada e pH-dependentes para as metaloproteases de Bothrops spp
• Beneficiário: Isadora Sousa de Oliveira
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Processo FAPESP: 17/00586-6 - Caracterização de um inibidor de fosfolipase A2 da glândula de peçonha de Crotalus durissus terrificus: um possível adjuvante na terapia do envenenamento
• Beneficiário: Gisele Adriano Wiezel
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado