| Texto completo | |
| Autor(es): |
Carreno, Flávia R.
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Goni, Camila N.
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Castro, Leandro M.
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Ferro, Emer S.
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Número total de Autores: 4
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| Tipo de documento: | Artigo Científico |
| Fonte: | Journal of Neurochemistry; v. 93, n. 1, p. 10-25, Apr. 2005. |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Morfologia |
| Assunto(s): | Peptídeo hidrolases Oligopeptídeos Fosforilação |
| Resumo | |
Endopeptidase 24.15 (ep24.15: EC3.4.24.15), a secreted protein involved in peptide metabolism, is unusual in that it does not contain a signal peptide sequence. In this work, we describe the physical interaction between ep24.15 and 14-3-3 epsilon, one isoform of a family of ubiquitous phosphoserine/threonine-scaffold proteins that organizes cell signaling and is involved in exocytosis. The interaction between ep24.15 and 14-3-3 epsilon increased following phosphorylation of ep24.15 at Ser644 by protein kinase A (PKA). The co-localization of ep24.15 and 14-3-3 epsilon was increased by exposure of HEK293 cells (human embryonic kidney cells) to forskolin (10 µm). Overexpression of 14-3-3 epsilon in HEK293 cells almost doubled the secretion of ep24.15 stimulated by A23187 (7.5 µm) from 10%[1.4 ± 0.24 AFU/(min 106 cells)] to 19%[2.54 ± 0.24 AFU/(min 106 cells)] (p < 0.001) of the total intracellular enzyme activity. Treatment with forskolin had a synergistic effect on the A23187-stimulated secretion of ep24.15 that was totally blocked by the PKA inhibitor KT5720. The ep24.15 point mutation S644A reduced the co-localization of ep24.15 and 14-3-3 in stably transfected HEK293 cells. Indeed, secretion of the ep24.15 S644A mutant from these cells was only slightly stimulated by A23187 and insensitive to forskolin, in contrast to that of the wild type enzyme. Together, these data suggest that prior interaction with 14-3-3 is an important step in the unconventional stimulated secretion of ep24.15. (AU) | |
| Processo FAPESP: | 00/04565-2 - Identificacao de alteracoes proteina-proteina envolvendo a endopeptidase ec 3.4.24.15 no sistema nervoso central, utilizando o "two hibridy system". |
| Beneficiário: | Camila Nascimento Goñi |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Iniciação Científica |
| Processo FAPESP: | 01/07544-9 - Projeto genoma estrutural. |
| Beneficiário: | Emer Suavinho Ferro |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Regular |
| Processo FAPESP: | 99/01983-9 - Bases moleculares e celulares da biologia da peptidases: projeto ii do laboratorio de comunicacao celular. |
| Beneficiário: | Emer Suavinho Ferro |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Regular |
| Processo FAPESP: | 04/04933-2 - Biologia celular molecular de oligopeptidases |
| Beneficiário: | Emer Suavinho Ferro |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Temático |
| Processo FAPESP: | 97/10831-2 - Setor de biologia molecular do Departamento de Histologia e Embriologia do ICB da USP |
| Beneficiário: | Emer Suavinho Ferro |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Programa Infraestrutura - Equipamentos |
| Processo FAPESP: | 00/04297-8 - Modernização do setor multiusuários de Bioquímica e Biologia Molecular do Departamento de Histologia e Embriologia |
| Beneficiário: | Emer Suavinho Ferro |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Programa Equipamentos Multiusuários |
| Processo FAPESP: | 01/07319-5 - Analise molecular e ultraestrutural da via de secrecao nao convencional das endooligopeptidases neurolisina (ec3.4.24.16) e "thimet oligopeptidase" (ec3.4.24.15). |
| Beneficiário: | Flavia Regina Carreno |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Doutorado |
| Processo FAPESP: | 96/05904-8 - Novos mecanismos de secreção e associação extracelular de proteínas |
| Beneficiário: | Emer Suavinho Ferro |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Regular |