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(Referência obtida automaticamente do Web of Science, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores.)

Engineering the Pattern of Protein Glycosylation Modulates the Thermostability of a GH11 Xylanase

Texto completo
Autor(es):
Fonseca-Maldonado, Raquel [1] ; Vieira, Davi Serradella [2] ; Alponti, Juliana Sanchez [2] ; Bonneil, Eric [3] ; Thibault, Pierre [3] ; Ward, Richard John [2, 4]
Número total de Autores: 6
Afiliação do(s) autor(es):
[1] Univ Sao Paulo, Fac Med Ribeirao Preto, Dept Bioquim & Imunol, BR-14049900 Sao Paulo - Brazil
[2] Univ Sao Paulo, Fac Filosofia Ciencias & Letras Ribeirao Preto, Dept Quim, BR-14049901 Sao Paulo - Brazil
[3] Univ Montreal, Inst Res Immunol & Canc, Montreal, PQ - Canada
[4] Ctr Nacl Pesquisa Energia & Mat, Lab Nacl Ciencia & Tecnol Bioetanol, BR-13083970 Campinas, SP - Brazil
Número total de Afiliações: 4
Tipo de documento: Artigo Científico
Fonte: Journal of Biological Chemistry; v. 288, n. 35, p. 25522-25534, AUG 30 2013.
Citações Web of Science: 31
Resumo

Protein glycosylation is a common post-translational modification, the effect of which on protein conformational and stability is incompletely understood. Here we have investigated the effects of glycosylation on the thermostability of Bacillus subtilis xylanase A(XynA) expressed in Pichia pastoris. Intact mass analysis of the heterologous wild-type XynA revealed two, three, or four Hex(8-16)GlcNAc(2) modifications involving asparagine residues at positions 20, 25, 141, and 181. Molecular dynamics (MD) simulations of the XynA modified with various combinations of branched Hex(9)GlcNAc(2) at these positions indicated a significant contribution from protein-glycan interactions to the overall energy of the glycoproteins. The effect of glycan content and glycosylation position on protein stability was evaluated by combinatorial mutagenesis of all six potential N-glycosylation sites. The majority of glycosylated enzymes expressed in P. pastoris presented increased thermostability in comparison with their unglycosylated counterparts expressed in Escherichia coli. Steric effects of multiple glycosylation events were apparent, and glycosylation position rather than the number of glycosylation events determined increases in thermostability. The MD simulations also indicated that clustered glycan chains tended to favor less stabilizing glycan-glycan interactions, whereas more dispersed glycosylation patterns favored stabilizing protein-glycan interactions. (AU)

Processo FAPESP: 10/52322-3 - Bioprospecção de fungos filamentosos produtores de holoenzimas com aplicação em biorefinaria
Beneficiário:Maria de Lourdes Teixeira de Moraes Polizeli
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Programa BIOTA - Regular
Processo FAPESP: 08/57908-6 - Instituto Nacional de Biotecnologia para o Bioetanol
Beneficiário:Marcos Silveira Buckeridge
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Programa BIOEN - Temático
Processo FAPESP: 10/18850-2 - Identificação, caracterização e engenharia de enzimas que degradam a parede celular das plantas
Beneficiário:Richard John Ward
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Temático
Processo FAPESP: 09/50838-5 - Determinantes de estabilidade estrutural de enzimas xilanases termofílicas mutantes por dinâmica molecular: efeitos da glicosilação sobre a termoestabilidade
Beneficiário:Davi Serradella Vieira
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado