Estudo molecular e funcional de transportadores de íons em membranas

Resumo

O objetivo geral do projeto é a investigação de mecanismos de transporte iônico em células de origem renal e em outros tecidos, do ponto de vista molecular e funcional. Com esta finalidade serão usadas metodologias de microperfusão de rim de rato "in vivo", de microperfusão de túbulos isolados de rim de rato ou coelho "in vitro", de biologia molecular incluindo a expressão de formas selvagens e mutantes de transportadores, de eletrofisiologia ("patch clamp") para a análise de canais iônicos individuais, de regulação de volume celular e do papel de transportadores de membrana em sua regulação. Estes estudos serão realizados em rim de mamífero, em células de origem renal e intestinal e de outros tecidos em cultura (MDCK, T84, LRPTC e outras) e de células de criptas colônicas. Serão investigados os mecanismos de secreção de H+ e de K+ (H+-ATPases, H+/K+-ATPases, permutador Na+/H+, canais de K+) e de bicarbonato (permuta CI-/HCO3-, cotransportador Na+/HCO3-, processos passivos), bem como os efeitos de agentes hormonais como Angiotensina II, Aldosterona, Fator Natriurético Atrial, Hormônios da Tireóide, Parato-hormônio e Vasopressina isoladamente ou em combinação, nestes processos. Serão usadas técnicas que permitem a determinação de fluxos transepiteliais de H+, K+ e HCO3-, isto é, microeletrodos sensíveis a prótons e a Potássio, bem como métodos para a avaliação de fluxos destes íons em membranas celulares individuais (apical e basolateral), através da medida do pH celular por marcadores fluorescentes e microeletrodos. Serão investigadas características moleculares do permutador Na+ /H+, sua modulação genética e suas vias de sinalização celular, incluindo a identificação de isoformas de proteína Quinase C envolvidas na modulação deste mecanismo de transporte em diferentes situações experimentais. (AU)