Caracterização molecular e funcional de proteínas que compõem o complexo spliceosomal em tripanosomatídeos

Resumo

Em tripanosomatideos, o processo de trans-splicing é responsável pelo processamento dos pré-mRNAs policistronicos, resultando na individualização de cada gene, de modo que cada mRNA contenha a seqüência spliced leader (SL) na extremidade 5. Esse processo requer a participação das ribonucleoproteínas (snRNPs) U2, U4/U6, U5 e SL RNP, que são constituídas por snRNAs, 7 proteínas Sm (comuns a todos) e proteínas especificas de cada partícula. Através da produção in vivo e purificação da proteína SmD1-PTP tagged, foi possível a identificação de 41 proteínas que interagem com essa partícula, das quais 16 foram anotadas como proteínas conservadas hipotéticas. Dentre essas, já foi possível a identificação de um homólogo de proteína especifica U1-A, uma proteína Lsm, uma proteína U5 especifica e duas proteínas que não se ligam diretamente a esses snRNAs, mas que provavelmente participam do mecanismo como fatores de splicing. Sendo assim, este projeto propõe a caracterização molecular e funcional das outras 11 proteínas conservadas hipotéticas com o intuito de identificar novos possíveis pontos de ataque quimioterápico parasita-específico. Para isso serão utilizadas técnicas de PTP-tag, primer extension para a análise de ligação aos snRNAs, RNAi para a verificação da essencialidade para a sobrevivência do parasita e funcionalidade na reação de trans-splicing. Os dados obtidos serão importantes em futuros experimentos de avaliação de mecanismo de ação de substâncias tripanocidas na reação de trans-splicing em tripanosomas. (AU)