Avaliação morfofuncional da espermatogônia tronco durante a espermatogênese sazonal de rãs-touro

Resumo

Nos anfíbios, a espermatogênese e a esteroidogênese variam de acordo com a sazonalidade. No inverno, as células intersticiais de Leydig são escassas e quiescentes. Entretanto, nos lóbulos seminíferos, as espermatogônias primordiais (EP) são fortemente imuno-positivas para testosterona. Em alguns sapos, tem sido demonstrado que a testosterona é convertida em estrógeno pela enzima aromatase e que este hormônio (estrógeno) apresenta um importante papel sobre a espermatogênese. Portanto, será proposto avaliar os níveis séricos de testosterona, bem como localizar a testosterona no citoplasma das EP e avaliar se este hormônio é mantido nestas células via receptor de andrógeno (AR) ou proteínas ligantes deste hormônio (SHBG/ABP). Além disso, será também proposto avaliar a atividade mitótica (PCNA) das EP em períodos sazonais distintos, bem como a possível participação da aromatase e, portanto, do estrógeno, nestas células. Sendo assim, dezesseis rãs-touro adultas do sexo masculino serão coletadas no inverno (GI; n=8) e verão (GV; n=8). Os testículos serão fixados e processados para inclusão em historesina e parafina. Nos cortes de parafina, serão realizadas as reações imuno-histoquímicas para a detecção de: GFRalfa-1 (para comprovar se as EP são células-tronco), SHBG/ABP, AR, aromatase e PCNA. A atividade mitótica das EP será avaliada pela quantificação do número de EP/mm2 de lóbulo seminífero, bem como pelo número de EP PCNA-positivas. Alguns fragmentos testiculares serão processados para a microscopia eletrônica de transmissão. Nos cortes ultrafinos, será realizada a reação imunocitoquímica para detecção de testosterona a fim de avaliar a localização deste hormônio no citoplasma das espermatogônias primordiais. (AU)