Efeito da administração aguda de iodo sobre a expressão e a atividade do promotor do gene da pendrina: estudo in vivo e in vitro

Resumo

Pendrina é uma proteína transportadora de ânions, codificada pelo gene PDS. Ela é expressa em vários tecidos, bem como na tiróide, onde está inserida na membrana apical de células foliculares. Estudos demonstraram que a pendrina pode mediar o efluxo apical do iodeto dos tirócitos para o lúmen folicular. Sabendo-se que o iodo é fundamental para a síntese de hormônios tiroidianos e considerando-se que a expressão de alguns mRNAs que codificam proteínas envolvidas com o transporte de oligominerais é modificada por alterações no aporte dos mesmos, é objetivo deste trabalho avaliar, por meio de estudos in vivo e in vitro, o efeito da administração aguda de iodo na expressão do mRNA e proteína pendrina em curtos períodos de tempo (30 min à 24 h), bem como analisar o efeito desse tratamento na atividade da região promotora do gene PDS. Serão utilizados ratos machos Wistar (~200 g), divididos nos grupos: controle e iodo, os quais receberão injeção ip de salina (0,9% NaCl) ou NaI (2 mg de NaI em 0,5 ml de salina), respectivamente, sendo decapitados após 30', 1 e 24 h da administração do iodo/salina. O RNA total da tiróide será extraído para a análise da expressão e grau de poliadenilação do mRNA da Pendrina por Real Time PCR. Para o estudo in vitro será utilizada a linhagem celular de tiróide normal de rato PCCl3, que ao atingir 70% de confluência, será tratada ou não com 10-3 M de NaI. O experimento será realizado em triplicata; as células permanecerão sob tratamento por 30 min, 1 h, e 24 h, e, após esses períodos de tempo, serão removidas e o RNA extraído para análise da expressão do mRNA da Pendrina por Real Time PCR. Para a análise da atividade do promotor de PDS, este será inserido no vetor pGL3-básico, que contém o gene da luciferase, cuja atividade servirá como indicador da atividade deste promotor nas condições de tratamento estudadas.