Envolvimento da imunidade inata e de fatores placentários na fisiopatologia da pré-eclâmpsia

Resumo

A pré-eclâmpsia é uma síndrome específica da gestação caracterizada por uma resposta inflamatória sistêmica, de maior intensidade do que a observada na gestação normal. Tem sido sugerido que esta patologia tem origem na placenta e, que fatores angiogênicos desempenham importante papel no desenvolvimento vascular durante a invasão trofoblástica e que citocinas de perfil Th2 podem estar envolvidas na manutenção da gestação. Os objetivos deste projeto são: 1) Avaliar o estado de ativação endógena de monócitos pela expressão de receptores TLR2 e TLR4, bem como da ativação do fator de transcrição nuclear NF-kB nessas células em gestantes portadoras de pré-eclâmpsia, classificada quanto à idade gestacional de aparecimento das manifestações clínicas da doença em pré-eclâmpsia precoce (< 34 semanas de gestação) ou pré-eclâmpsia tardia (e 34 semanas de gestação); 2) Correlacionar a expressão de TLR2 e TLR4 em monócitos de gestantes portadoras de pré-eclâmpsia precoce ou tardia com a produção de IL-10, IL-12 e TNF-alfa por essas células estimuladas com peptideogligano (PG) e lipopolissacáride (LPS), considerados agentes agonistas de TLR2 e TLR4 respectivamente; 3) Determinar a expressão de citocinas pró-inflamatórias (GM-CSF e TNF-alfa) e anti-inflamatórias (IL-10 e TGF-beta1), de fatores pró-angiogênicos (PIGF e VEGF), bem como de fatores anti-angiogênicos (Eng e sFlt1) em placentas de gestantes normais e com pré-eclâmpsia; 4) Verificar se os parâmetros estudados diferenciam pré-eclâmpsia precoce e tardia. Serão estudadas 48 gestantes, sendo 16 normotensas e 32 portadoras de pré-eclâmpsia, pareadas pela idade gestacional. Monócitos de sangue periférico obtidos de gestantes normais ou com pré-eclâmpsia serão cultivados na presença ou ausência de lipopolissacáride de Escherichia coli (LPS) ou de peptidoglicano (PG) de bactéria Gram-positiva. O sobrenadante obtido após 18h de cultivo será aspirado e empregado para dosagem das citocinas TNF-alfa, IL-10 e IL-12, pela técnica de ELISA. A expressão dos receptores TLR2 e TLR4 presentes na superfície dos monócitos será avaliada por citometria de fluxo, empregando-se anticorpos monoclonais específicos, marcados com fluorocromos logo após a coleta do sangue (expressão endógena dos receptores) ou após 18 h de incubação com LPS ou PG (expressão ativada). Um fragmento de placenta será obtido imediatamente após o parto e preparado para análise histopatológica, sendo os cortes histológicos de 4um de espessura colocados sobre lâmina histológica para coloração pelo método de Hematoxilina - Eosina (HE) e análise imunohistoquímica da expressão de GM-CSF, TNF-alfa, IL-10, TGF-beta1, PlGF, VEGF, sFlt1 e Endoglina por células do tecido placentário. (AU)