Inibição do vírus da hepatite C utilizando siRNAs direcionados para o genoma viral e proteínas celulares Hsps

Resumo

A hepatite C é conseqüência da infecção pelo vírus da hepatite C (VHC) e estima-se que aproximadamente 170 milhões de pessoas estejam cronicamente infectadas pelo vírus. Recentemente tem-se demonstrado diversas interações entre proteínas virais e do hospedeiro durante o ciclo de replicação do VHC e tais interações criam oportunidades de uma nova estratégia para terapias contra a hepatite C. Apesar da inibição de proteínas virais via RNAi se mostrar relativamente eficaz na redução da replicação do VHC, a inibição combinada entre as proteínas virais e do hospedeiro pode reduzir a replicação mais eficientemente, visto que a taxa de mutação gênica do hospedeiro é menor que a viral, reduzindo assim as taxas de evasão viral e fornecendo uma resposta virologica mais sustentada. As proteínas pertencentes á família das Hsps (heat shock proteins), são fortes candidatas a essa nova abordagem, pois não são proteínas essenciais à célula, o que permite sua inibição sem maiores danos. Além disso, já foi demonstrada a interação entre as Hsp27, Hsp70 e Hsp90 com proteínas do VHC, como NS3 e NS5A. O objetivo deste trabalho é inibir a replicação viral utilizando-se quatro moléculas de siRNAs direcionadas para o genoma viral em combinação com siRNAs direcionados para as proteínas celulares Hsp27, Hsp70 e Hsp90. As moléculas de siRNA serão transfectadas em células Huh7 transfectadas com o replicon sub-genômico pSGR-JFH1 e avaliadas quanto a sua eficácia na inibição da replicação do vírus. A eficiência das moléculas de siRNAs será avaliada por PCR em tempo real e western blot e espera-se que a inibição combinada de proteínas celulares e virais seja mais eficiente na redução da replicação viral.