Associação da expressão de CD39 em células Tregs com a eficácia terapêutica do metotrexato no tratamento da artrite reumatoide

Resumo

A artrite reumatóide (AR) é uma doença autoimune inflamatória que afeta 1% da população mundial e é caracterizada por um infiltrado de células do sistema imune no espaço sinovial articular. A estratégia terapêutica de primeira escolha para o tratamento da AR consiste no uso de doses baixas de Metotrexato (MTX), um inibidor da enzima diidrofolato redutase. No entanto, uma parte considerável dos pacientes com AR é refratária ao tratamento com MTX e o mecanismo pelo qual este fenômeno ocorre ainda não foi estabelecido. Dados da literatura dos últimos anos demonstram que o efeito antiinflamatóriodo MTX associa-se com sua sua capacidade de aumentar os níveis extracelulares de adenosina (ADO). Neste contexto, um estudo recente do nosso grupo de pesquisa demonstrou que pacientes artríticos não responsivos ao tratamento com MTX (UR-MTX) apresentam uma menor expressão da ectonucleotidase CD39 em células T reguladoras (Tregs) circulantes. Ressalta-se que uma das principais vias de produção de adenosina é a metabolização do ATP pelas ectonucleotidases CD39/ENTPD1 e CD73/ecto-5 'nucleotidase. Logo, a análise de alterações nas vias de regulação da expressão de CD39 em células Tregs é um dos primeiros passos para esclarecer os fenômenos relacionados com a refratariedade de pacientes ao MTX. Apesar de não existirem relatos do mecanismo de indução da expressão de CD39 em Tregs, a literatura descreve que a indução da expressão do CD39 está relacionada com a ativação de CREB (elemento de ligação de resposta ao AMPc), por uma via de sinalização dependente da proteína quinase A (PKA) e/ou por ações dos SMADS. Em células Tregs, a ativação da sinalização de CREB é induzida por TGF-², citocina crucial para o processo de diferenciação deste subtipo celular. A partir destas informações, é plausível que a expressão de CD39 em células Tregs seja induzida por TGF-², o qual atua ativando CREB por uma sinalização dependente da via SMADS/CREB ou PKA/CREB. Em adição, é provável que ocorra alterações nesta via de sinalização em pacientes UR-MTX. Assim, o objetivo do presente estudo é identificar o mecanismo de indução da expressão de CD39 em células Tregs e a avaliar se a refratariedade ao MTX é devido à alterações nestas vias moleculares nas células Tregs. Para isto propomos: a) demonstrar o mecanismo de indução e regulação da expressão de CD39 em células Tregs; b) identificar alterações na expressão e ativação de moléculas relacionadas com a via do TGF-² em pacientes (UR-MTX) na indução da expressão de CD39 c) avaliar o potencial terapêutico da Apyrase (CD39 purificada) no desenvolvimento da artrite experimental em modelo de artrite induzida por antígeno (AIA). (AU)