Efeito de Smads e de microRNAs na expressão gênica de TGF-B1 e seu papel na angiogênese em pacientes com mielofibrose primária e trombocitemia essencial

Resumo

A angiogênese possui papel importante na mielofibrose primária (MFP) e trombocitemia essencial (TE), sendo principalmente modulada pelo fator transformador do crescimento (TGF)-B1, fator de crescimento de endotélio vascular (VEGF) e o fator básico de crescimento de fibroblastos (bFGF). O objetivo desse estudo é investigar o efeito da expressão de RNAm da família das Smads (Smad1 a 8/9) e de microRNAs (miR-193a-5p, miR-369-5p, miR-542-5p, miR-590-5p e miR-590-3p) na expressão gênica (RNAm e proteínas plasmáticas) de TGF-B1 e seu papel na fisiopatologia da angiogênese em pacientes com MFP e TE. Serão estudados 80 pacientes com MFP e TE atendidos no Departamento de Hematologia e Oncologia da Universidade Federal de São Paulo - UNIFESP, pareados com 160 indivíduos saudáveis quanto ao gênero e à idade. Amostras de medula óssea serão obtidas de 30 dos 80 pacientes com MFP e TE para análise citogenética e pesquisa de alterações cromossomais, determinação do mielograma e biópsia da medula óssea, análises imunohistoquímicas (densidade microvascular, expressão de TGF-b1 latente e ativo e de c-MPL), análise da expressão de RNAm (Smad1 a 8/9, TGFB1, VEGFA e bFGF) e microRNAs (miR-193a-5p, miR-369-5p, miR-542-5p, miR-590-5p e miR-590-3p). As análises de expressão de RNAm e miRNA também serão realizadas em leucócitos totais de sangue periférico desses indivíduos, bem como dos outros 50 dos 80 pacientes com MFP e TE e dos indivíduos saudáveis. Além disso, serão realizadas a determinação do hemograma e proteína C reativa ultrassensível, dosagem das concentrações plasmáticas de TGF-B1, VEGFA, bFGF em pacientes e indivíduos saudáveis. Do sangue total dos pacientes será feita extração do DNA genômico para pesquisa da mutação e quantificação dos alelos JAK2V617F e avaliação de mutações no exon 12 do gene JAK2 e W515K/L e S505N no gene MPL. A expressão gênica de RNAm e de microRNAs será comparada com a intensidade da angiogênese, avaliada por densidade microvascular para pacientes dos quais será coletada a biópsia de medula óssea, e por concentração plasmática de TGF-B1 e VEGFA em pacientes dos quais será realizada apenas coleta de sangue periférico. Como resultado do presente estudo, espera-se contribuir para o melhor entendimento do papel do TGF-B1 e sua interação com VEGFA e bFGF e microRNAs na fisiopatologia da angiogênese na MFP e TE. (AU)