Identificação e caracterização de cisteíno peptidases do inseto Diaphorina citri, vetor da doença Huanglongbing e estudos de interação entre as cisteíno peptidases e cistatinas de citros

Resumo

A citricultura brasileira é uma das mais importantes atividades agrícolas para a economia nacional. O Brasil é hoje o maior produtor de laranja do mundo e o maior exportador de suco de laranja concentrado e congelado. Os pomares de citros vêm sendo constantemente atacados por diversas pragas e patógenos, que causam sérios danos às plantas e, conseqüentemente, uma expressiva queda na produtividade. Uma doença que surgiu recentemente denominada Huanglongbing vem causando sérios prejuízos à citricultura, pois as plantas contaminadas apresentam menor tamanho dos frutos, maior grau de acidez e menor porcentagem de suco. Esta doença é causada pela bactéria Candidatus Liberibacter spp que coloniza os vasos do floema e é transmitida às plantas de citros pelo inseto Diaphorina citri, uma praga que vem se disseminando nos últimos anos, sem um método de controle eficiente. Uma alternativa para controlar a incidência desta doença nos pomares de citros seria o desenvolvimento de plantas transgênicas resistentes ao inseto Diaphorina citri. A utilização de inibidores de proteases no desenvolvimento de plantas transgênicas é uma abordagem que vem sendo amplamente utilizada há alguns anos no controle de pragas, visto que estes inibidores de proteases têm se mostrado capazes de inibir proteases presentes no intestino de insetos. Assim, os objetivos deste projeto são identificação de cisteíno proteases de Diaphorina citri, expressão recombinante em sistema Pichia pastoris, purificação, caracterização destas enzimas em relação aos parâmetros cinéticos. Paralelamente serão realizadas buscas em banco de dados com informações do genoma de citros para identificação de inibidores de cisteíno proteases, que serão produzidos de forma recombinante. Posteriormente serão realizados ensaios de inibição da atividade enzimática das proteases de Diaphorina citri in vitro utilizando os inibidores de proteases de citros para a validação das enzimas alvo. Os inibidores de protease específicos para as enzimas de Diaphorina citri serão selecionados para a utilização em futuros estudos de desenvolvimento de plantas transgênicas (AU)