Proteólise intracelular em parasitas da malária: caracterização e inibição de proteases em um novo ensaio para o ‘screening’ de drogas antimaláricas

Resumo

Neste projeto, pretendo desenvolver e aplicar novas metodologias para o estudo da atividade proteolítica intracelular em parasitas da malária, associada aos mecanismos de sinalização e biologia celular. Essa nova abordagem irá permitir o teste de novas moléculas com atividade antimaláricas em colaboração com pesquisadores de diferentes instituições públicas. Deste modo, teremos novas informações sobre a regulação dessas enzimas (como os estímulos de mobilização por cálcio intracelular), que normalmente é difícil de ser observado nos ensaios convencionais de hidrólise in vitro com as proteases isoladas. A atividade proteolítica dos parasitas pode gerar peptídeos com ações fisiológicas sobre o hospedeiro (ex. peptídeos vasodilatadores/cininas), neste caso estaremos também analisando essa atividade enzimática, na qual pode representar em informações com grande relevância biológica para o entendimento da doença e melhores estratégias para a utilização dos antimaláricos atuais. A metodologia para o estudo de proteases inclui a utilização de peptídeos que apresentam apagamento intramolecular fluorescência, a hidrolise desses substratos pelos parasitas pode ser acompanhada por espectrofluorimetria e microscopia de fluorescência. Como observamos anteriormente que os parasitas da malária são permeáveis a diferentes peptídeos de fluorescência apagada (Farias et al 2005), buscamos aplicar e desenvolver essa abordagem como um ensaio altamente sensível para avaliar ('screening') antimaláricas, e também caracterizar a atividade de diferentes proteases em eventos metabólicos durante o desenvolvimento dos parasitas da malária. (AU)