Estudo de enzimas proteolíticas envolvidas em processos fisiológicos e fisiopatológicos

Resumo

As enzimas proteolíticas atuam em inúmeros processos essenciais para todos os organismos vivos. Entretanto, em muitos processos patológicos as peptidases de mamíferos são expressas de forma desordenada e por este motivo adquiriram importância significativa tornando-se importantes alvos terapêuticos. Embora a nossa proposta seja o estudo de diferentes classes de peptidases, o trabalho converge para um objetivo comum que é contribuir para um melhor entendimento das funções destas enzimas. A nossa proposta para o presente projeto é estudar o envolvimento de catepsinas lisossomais em processos fisiológicos e fisiopatológicos oculares. Estudaremos ainda a atividade catalítica de cisteino-peptidases do Plasmodium falciparum, usando novas metodologias que vem sendo desenvolvidas em nosso grupo, como por exemplo, a avaliação de proteólise intracelular utilizando substratos com supressão intramolecular de fluorescência por microscopia confocal. Esta estratégia possibilita a identificação de novos inibidores destas enzimas que podem ter ação antimalárica, uma vez que as proteases são essenciais para o desenvolvimento do parasita. Ainda no presente projeto, estudaremos a enzima conversora da angiotensina I (ECA). Verificamos anteriormente que o peptídeo Abz-SDK(Dnp)P-OH é um substrato especifico para o domínio N (Araújo e cols., 2000). Entretanto, este peptídeo tem limitação de uso devido à baixa eficiência catalítica apresentada. Assim, pretendemos obter substratos seletivos para o domínio N que permitam a detecção da enzima mesmo quando ela está presente em baixas concentrações. Para isso usaremos as bibliotecas de peptídeos fluorogênicos (OS-SC) desenvolvidas por em nosso laboratório (Bersanetti e cols., 2004) para definir agora os resíduos importantes para a seletividade do domínio N da enzima conversora da angiotensina I. Com base nos resultados, sintetizaremos substratos seletivos para o domínio N da enzima. (AU)