A superexpressão da Plasmodium falciparum M1 aminopeptidase promove o aumento na proteólise intracelular e modifica o desenvolvimento do ciclo eritrocítico assexuado

Resumo

Plasmodium falciparum, o mais virulento parasita da malária humana, é responsável por altas taxas de mortalidade em todo o mundo. Estudamos a M1 alanil-aminopeptidase desse protozoário (PfA-M1), que está envolvida nos estágios finais da clivagem da hemoglobina, processo essencial para a sobrevivência do parasita. Com o objetivo de auxiliar no desenvolvimento racional de fármacos contra esse alvo, desenvolvemos uma nova cepa de P. falciparum com superexpressão de PfA-M1 sem o peptídeo sinal (overPfA-M1). Os parasitas overPfA-M1 apresentaram aumento de 2,5 vezes na atividade proteolítica em relação ao substrato fluorogênico alanil-7-amido-4-metilcumarina, em relação ao grupo selvagem. Estudos de inibição mostraram que overPfA-M1 apresentou menor sensibilidade contra a metaloaminopeptidase in-hibitor bestatina e a outros inibidores de PfA-M1 recombinantes, em comparação com a cepa do tipo selvagem, indicando que PfA-M1 é um alvo para a atividade antimalárica in vitro desses compostos. Além disso, os parasitas overPfA-M1 apresentam uma diminuição do crescimento in vitro, mostrando um número reduzido de merozoítos por esquizontes, e também uma diminuição na área iRBC ocupada pelo parasita nas formas trofozoíta e esquizontes quando comparados aos controles. Curiosamente, o parasita transgênico exibe um aumento na atividade da aminopeptidase para Met-, Ala-, Leu- e Arg-7-amido-4-metilcumarina. Nós também investigamos o papel potencial das proteases calmodulina e cisteína na atividade de PfA-M1. Tomados em conjunto, nossos dados mostram que a superexpressão de PfA-M1 no citosol do parasita pode ser uma ferramenta adequada para a triagem de antimaláricos em ensaios específicos de alto rendimento e pode ser usada para a identificação de parceiros moleculares intracelulares que modulam sua atividade em P falciparum. (AU)