Participação das células supressoras derivadas da linhagem mielóide na inibição induzida pelo PAFR da hipersensibilidade de contato

Resumo

Células supressoras derivadas da linhagem mieloide (MDSC) correspondem a um grupo de células que modulam a resposta imune por induzir a geração de Treg, por produzir TGF-beta, IL-10, etc. Nós mostramos que o perfil regulador de macrófagos induzido por células apoptóticas é dependente do receptor do fator ativador de plaquetas (PAFR), e que PAFR contribui para o crescimento tumoral. Travers e colaboradores descreveram que a promoção do crescimento tumoral pelo PAFR envolve a geração de células Treg e produção de IL-10. Mais ainda, o mesmo grupo mostrou que a ativação do PAFR inibe a hipersensibilidade de contato (CHS) de maneira dependente da geração de Treg. Estes dados mostram que o PAFR está envolvido na modulação da resposta imune. Contudo, os mecanismos envolvidos na imunossupressão induzida pelo PAFR ainda não estão claros. Nós hipotetizamos que MDSC são geradas/ativadas pela ativação do PAFR e que isto poderia contribuir para as características imunomoduladoras deste receptor. Neste projeto, nós pretendemos avaliar se (e como) MDSC estão envolvidas nos mecanismos da inibição dependente de PAFR da CHS. Para tanto, utilizaremos um modelo bem estabelecido de indução de oxidação de lipídeos in vivo utilizando agentes estressores ambientais. Camundongos WT e PAFR KO serão irradiados com radiação ultravioleta (UV) ou expostos a fumaça de cigarro (CS) (estressores que geram ligantes do PAFR) antes da indução da CHS na orelha com dinitrofluorobenzeno. As quantidade de MDSC no baço e orelha será determinada por citometria de fluxo e comparada entre camundongos WT e PAFR KO. Em paralelo, MDSC serão separadas e analisadas para detecção da expressão do PAFR. Para se avaliar o papel das MDSC na inibição dependente de PAFR da CHS, células Gr1+ (MDSC) serão depletadas em camundongos PAFR KO e WT utilizando-se anticorpos antes da irradiação com UV ou exposição a CS. A frequência de células Treg e/ou expressão de FOXP3 em linfonodos será determinada e a espessura das orelhas será medida. Para avaliar se células Treg contribuem para a geração/ativação das MDSC, células CD25+ serão depletadas e quantidades de MDSC serão determinadas. Em todos os casos, esplenócitos serão coletados para cultura e detecção de citocinas após estímulo com LPS para avaliação do perfil de ativação das células (M1/M2). (AU)