Efeito do hidróxido de cálcio sobre a diferenciação in vitro de células de papila apical ativadas por LTA

Resumo

O tratamento de dentes com ápice incompleto constitui um dos grandes desafios da Endodontia atual. O estudo do efeito de medicações intracanal sobre células da papila apical tem recebido atenção especial nesta área do conhecimento ao longo dos últimos anos. Entretanto, poucos estudos têm considerado a ativação prévia destas células por subprodutos bacterianos em relação à sobrevivência e capacidade de diferenciação. Sendo assim, este projeto tem como objetivo investigar a citotoxicidade e a diferenciação osteo/odontogênica de células de papila apical humana em cultura sob contato com hidróxido de cálcio após ativação prévia. Culturas primárias de células de papila apical (n = 3) serão estabelecidas a partir de técnica de explant. Parte das células será ativada com 1 µg/mL de ácido lipoteicóico (LTA) de Enterococcus faecalis por sete dias. As células serão distribuídas em placas de 96 ou 24 poços. A citotoxicidade de hidróxido de cálcio em concentrações crescentes será avaliada pelo método MTT para seleção da maior concentração incapaz de afetar a viabilidade celular após cinco dias. Células ativadas ou naïve serão mantidas em contato com hidróxido de cálcio na concentração selecionada por cinco dias e então submetidas à diferenciação odontogênica por 14 e 28 dias. A diferenciação celular será avaliada por meio da detecção de deposição de cálcio por Vermelho de alizarina S e da expressão gênica de proteína de matriz dentinária-1, sialofosfoproteína de dentina e osteocalcina por meio de transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase quantitativa (RT-qPCR). Os dados serão analisados por meio de análise de variância a um critério adotando-se como significativos valores de p < 0,05.